TOP10化学感受态细胞 TOP10感受态细胞

Q：pUC19 (control vector, 10 pg/μL)是什么抗性？

A：氨苄抗性的。

Q：11801 和 11802 有什么区别？

A：11802 稳定一些，比较常用。

Q：最大可以转化多大的质粒？ 约 20kb 可以吗？

A：转化质粒的大小与菌株有关， DH5α和 Top10 感受态细胞适合小于 15kb 的质粒。

Q：菌体大片长，无单个菌落，是什么原因？

A：先用感受态细胞转到含抗生素的培养基中，如果不长，说明抗生素没有失效。在排除抗生素是否失效的原因后，检查转化步骤，在转化操作时，请勿将菌体全部涂布于平板上。因为大量菌体的存在抑制正常转化子的生长。改正的方法有两种：一是省去 37℃ 复苏培养的步骤，这样不但节省了时间，而且也不出现云雾了；二是 37℃复苏后只吸取 50-100 µL 菌液涂布即可。

Q：涂布 Amp＋板后，总是有很多卫星菌落，单菌落长不大。

A：Amp 抗性板铺板密度过高或培养时间过长都会导致出现对 Amp 敏感的卫星菌落， 因此涂布 Amp 抗性板时菌密度应适当降低，同时 37℃培养时间不超过 20 h。另外推荐选择培养基中使用羧苄青霉素代替氨苄青霉素(Amp)，并将抗生素浓度提高到  100µg/mL，可使情况改善。