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Q:Carrier RNA 有哪些常见类型及各自的作用原理?
A:多聚糖(糖原):RNA 在高盐、无水乙醇环境中溶解度很低,通过高速离心可发生沉淀。当RNA 浓度很低时,微量 RNA 不足以形成沉淀。在上述环境条件下,糖原也不可溶并可与 RNA 共沉淀,形成可视化沉淀。
核酸混合物(PolyA 钾盐、大肠杆菌总 RNA、酵母总 RNA、tRNA 等):减少吸附损失,降低核酸酶攻击待提取核酸的概率。
其他物质(线性化丙烯-酰胺):减少吸附损失。
Q:加入 Carrier RNA 得到的核酸可以用于 PCR 或者 RT-PCR 吗?
A:最后获得的含有 Carrier RNA 的痕量核酸可直接用于 PCR 或 RT-PCR 反应。
Q:Carrier RNA 和糖原有什么区别
A:糖原是不能够被硅胶柱吸附的,而 Carrier RNA 可以,所以过柱法的试剂盒需要配合 Carrier RNA使用。
Q:因为我提了 9 个样品,测出来 RNA 浓度是差不多的,然后反转跑 β-actin,条带亮度相差很大,有3 个样品还没有条带,所以在想 Carrier RNA 和目标 RNA 是不是随机结合在柱子上(或者随机洗脱的)?
A:测的浓度其实就是 Carrier RNA 的浓度,所以看上去差不多。您样本的 RNA 含量太少,对这个数值可能都没有什么影响 。之所以出现现在的问题,应该是您的样本原因,那三个样本可能几乎没有RNA,或者含量太低了。
Q:Carrier RNA 的作用原理是什么?
A:Carrier RNA,中文名载体 RNA,又叫核酸助沉剂。在核酸提取环节,提取使用到的离心管壁多是聚丙烯的材料,管壁上有静电,会吸附核酸。在提取纯化过程中采用 Carrier RNA 可帮助核酸去除静电效应,保证核酸能很好被吸附到纯化柱上,提高洗脱效率,从而达到尽可能多的回收样本中核酸。
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