Hieff Canace®Veritas Long PCR Master Mix (No Dye)

Q：10165ES这款产品在进行10kb以上的长片段扩增时，是否还按照10kb以下的反应程序去运行？

A：针对10 kb以上的片段时，尽量选用68℃和10 sec/kb两者进行搭配，以提高扩增成功率。10kb以下的，可以选用5 sec/kb的扩增速度。

Q：10165ES这款产品能否用于长片段的cDNA扩增？实验中有什么建议？

A：（1）10165ES这款产品可满足1 kb-14 kb cDNA扩增，如果要进行长片段扩增，推荐使用翌圣生物经验证的11149ES反转录试剂盒对目的RNA进行反转录，得到的cDNA模板搭配10165ES进行长片段扩增。

（2）如果RNA样本较少或者需要获得很长的意向片段，建议反转录时不进行消化。意向片段越长，投入的RNA就需要越多，对应的cDNA也需要越多。

Q：若扩增产物存在突变怎么办？

A：10165ES是一款高保真的PCR产品，高保真意味着低错误率，更准确的序列。但不同的实验方式会存在差异，产物突变为低概率事件，建议新扩增多个重复组，从而获得未突变的扩增产物。

Q：10165ES可以扩增高GC含量的片段吗？

A：可以，经测试，10165ES可覆盖20-80% GC含量的片段，建议扩增高GC含量片段时，温度调整到68℃，成功率会大幅提升。

Q：我的样本为菌液，是否可以直接使用10165ES去扩增菌液？

A：10165ES可耐受一定程度的菌液，经测试，该产品可耐受比例占比在反应体系12.5%比例的菌液，且特异性较好，如果有需求进行菌液直扩，请将比例控制在12.5%以下。

Q：Hieff Canace® Long PCR Master Mix(No Dye)能否用于扩增含有尿嘧啶的cDNA模板？

A：10165ES这款产品可耐受一定量的cDNA原液，其中就包含有残留的RNA和降解的RNA，因此可以用含有尿嘧啶的cDNA作为模板，但存在一定量的范围，经产品性能测试，10165ES可满足比例占比在反应体系15%的cDNA投入量。

Q：Hieff Canace®Veritas Long PCR Master Mix(No Dye)能检测出多少投入量的样本？

A：（1）针对植物基因组，经产品性能测试，最低能检测出100pg的植物基因组。

（2）针对动物基因组，经产品性能测试，最低能检测出100pg的动物基因组。

（3）针对质粒，因质粒本身较为纯净，经产品性能测试，最低能检测出1pg的质粒。

Q：为什么我收到10165ES用过几次没有问题，这一次扩增长片段的时候却没有条带？

A：可能原因及解决方案：

(1) 10165ES的解冻要求需要在冰上缓慢解冻，不能常温解冻或者加热解冻。

(2) 在扩增长片段时，建议温度设置68℃，扩增速度为10 sec/kb。

(3) 扩增意向片段越长的时候，投入的模板应当越多。

(4) PCR 体系中引物浓度偏低或循环数不足：适当增加引物用量，或者增加扩增循环数；