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全部回答4
曹
曹涛
2026-09-15
样品总蛋白2mg/mL不算特别高，但1:50的AB如果亲和力较高，也可能结合过多蛋白形成复合物。可以尝试把AB用量降到1:100左右，或按抗体/总蛋白比例计算；同时把4℃旋转过夜改成2-4小时，缩短非特异结合时间。结合后用缓冲液充分洗涤，观察沉淀是否减少且回收率仍可接受。
余
余涛艳9444
2026-09-13
293T裂解上清即使看似澄清，也可能有DNA、脂蛋白和细胞碎片。建议裂解后高速离心，比如15,000g以上15分钟，取上清再过0.45μm或0.22μm滤膜。如果液体黏稠，可以加少量Benzonase核酸酶在冰上或室温处理10-20分钟降解核酸，再进行亲和纯化，白色絮状沉淀常会减少。
W
Wang9918
2026-09-15
可以先做一个试剂自身对照：把AB按1:50用相同缓冲液稀释，不加样品，4℃旋转过夜后离心，看是否出现白色絮状。如果也有，可能是AB本身在低温、盐浓度或pH条件下聚集，或稳定剂析出。可以先离心或过0.22μm滤膜再试，但过滤可能损失活性，建议小量验证后再决定。
W
WangKit8192
2026-09-14
出现白色絮状不一定意味着实验失败。先离心取上清继续纯化，沉淀留样做SDS-PAGE或Western，看条带是靶蛋白、杂蛋白还是抗体轻/重链。若沉淀主要是杂蛋白，可能是非特异结合；但要确认上清里靶蛋白是否明显减少。必要时在洗液中加入0.05-0.1%非离子去垢剂或提高NaCl浓度至150-300mM，减少非特异聚集。
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