96孔板BCA法每次只测20个样品，试剂配制比例可以减半吗？

体系可以等比缩小，但A液和B液的50:1比例不能变。比如原体系200 μL工作液加25 μL样品，可改为100 μL工作液加12.5 μL样品，或100 μL工作液加10 μL样品。样品量充足时建议用25 μL样品加100 μL工作液，这样显色强度和液面高度更稳定；样品量紧张可用10 μL样品加100 μL工作液，但检测下限会提高，低浓度样品误差变大。换用半量体系前，先用同一批样品对比200 μL和100 μL体系的标曲线性与计算浓度，偏差可接受再正式使用。

标曲点不建议少于6个，含空白点。样品少只省了一点工作液，但标曲点过少会让低浓度或高浓度端拟合失真，直接影响IP上样量。建议保留空白、0.05、0.1、0.25、0.5、1.0、2.0 mg/mL七个点，去掉0.025或增加0.75都可以，但不要只留3-4个点。标准品可做单孔，但样品至少复孔，尤其是低浓度样品复孔更重要。如果你想减少工作液浪费，省下的体积应优先用于重复样品孔，而不是压缩标曲点。

缩小体积后移液误差和蒸发影响会变大。建议用校准过的100 μL或200 μL移液器，工作液先统一预混后再加，不要逐孔分别加A和B。加液时贴壁慢速打出，避免产生气泡。96孔板外侧一圈不要放样品，可加PBS或水减少边缘效应。100 μL体积室温孵育时蒸发比例比200 μL高，必须加盖或用封板膜。读板前检查液面是否平整，气泡会显著干扰OD读数。液面较低时还要注意酶标仪光路是否对液面高度敏感。

换体系前先做对比验证，不要直接用于IP定量。取3-5个代表性样品，分别在200 μL和100 μL体系做标曲和样品，计算浓度偏差最好在10%以内再切换；如果超出，检查加样体积、孵育时间和读板条件。低浓度样品如果100 μL体系信号太弱，可考虑半孔板或高灵敏BCA，而不是简单增加样品体积破坏体系。IP上样对蛋白量敏感，建议每次定量都加入一个已知浓度质控品，方便判断批次间漂移。