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全部回答4
潘
潘阿宝
2026-09-12
用同一份真菌RNA分别做M-MLV H minus和AMV反转录，qPCR看内参Ct和扩增曲线，普通PCR看产物长度。重点看高GC目标基因能否稳定扩增，不要只看总cDNA产量。10000U做梯度对比足够，建议同时设无逆转录对照，排除基因组DNA污染。
L
LabZone
2026-09-11
AMV反应温度通常在42—60℃，确实有助于打开高GC模板的二级结构，但它的RNase H活性通常较强。真菌RNA GC偏高，如果只做短片段qPCR，AMV可能可以接受，但高温长时间反转录也可能加剧RNA降解。建议先小规模比较Ct值和产物。
F
Flask5368
2026-09-19
高GC模板无论选哪种酶，反转录前65—70℃变性5min并立即冰浴通常能改善可及性。如果AMV高温条件下Ct仍高，可尝试M-MLV H minus并用甜菜碱或DMSO辅助。抑制剂浓度需要梯度验证，避免影响后续qPCR效率。
L
Lab6607
2026-09-16
RNase H会降解RNA:DNA杂交链中的RNA，对cDNA产量和长片段完整性影响更明显。qPCR通常用短扩增子，有时Ct值差异不大，但若后续要建cDNA文库或扩增长片段，建议优先选RNase H minus的M-MLV，减少模板完整性损失带来的不确定性。
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