流式抗体滴定一般用多少浓度起始？有没有试用装可以申请？

试用装申请：BioLegend、BD、Thermo、Miltenyi等进口品牌常有小包装或试用装，但需要找授权代理，周期不定；国产如四正柏、Elabscience、达优等也可能提供5-10 tests试用。建议同时申请两三家，明确仪器、样本、预算单支不超2000。试用装量少，做完整滴定不够，可先做1:50、1:100、1:200三个点，确定大致工作浓度。对比时用同一供者PBMC，同一天做，避免批间和机器状态干扰。

滴定起始浓度建议按说明书推荐为中间点，向上下各做2倍系列，比如1:25、1:50、1:100、1:200、1:400。CD8a在PBMC阳性群强，APC也亮，1:100弱可能是抗体本身、细胞量或电压问题。滴定用统一细胞量10^6/100μL，冰上染色30分钟，每个浓度做单管。计算染色指数SI=（MFIpos-MFIneg）/（2×SDneg），选SI最高且背景不升高的浓度。若1:25仍弱，检查抗体保存、稀释液、是否固定后再染。

滴定正式实验建议记录FMO对照的阴性峰位置，帮助确定阳性界。如果1:100弱、1:50信号提升且背景可接受，就选1:50；不要盲目追求高浓度。选定浓度后，做一次小批量重复，看CD8+比例是否和文献一致。APC容易光漂白，染色后避光保存，尽快上机。若两三家试用都不理想，可能与克隆、仪器电压或补偿没有调好有关，可以请厂家技术远程看数据，再决定是否换货。

CD8a-APC按1:100染阳性群弱，先排除实验因素：注意细胞数量、染色体积、Fc Block、孵育温度和时间。全血与PBMC用量不同；若用PBMC，T细胞中CD8+比例约20-30%，阳性峰应明显。APC对固定敏感，如果先固定再染，信号会下降。建议新鲜样本先表染再裂红/固定。若都正常，可能是抗体滴度低或批次问题，联系厂家技术支持。