原代神经元转染siRNA，对细胞毒性小的转染试剂有推荐吗？

原代神经元对脂质体敏感，先建议把siRNA终浓度从50 nM降到20-30 nM，很多神经元靶基因在20 nM即可敲低，毒性会低不少。试剂可试 Lipofectamine RNAiMAX，24孔板每孔用0.5-1 μL，转染4h后半换液。有小包装0.1 mL，经费紧张可申请试用装。效率不像肿瘤细胞那么高，但神经元形态和存活率比普通Lipofectamine 2000好。

如果经费有限且想温和，可以看非脂质体类转染，比如 Mirus TransIT-siQUEST 或 Qiagen HiPerFect，毒副作用通常更低，有些可以全长培养基转染不用专门的Opti-MEM。24孔板50nM下，用HiPerFect 3μL/孔，转染后不换液，我做过原代海马神经元，死亡率可控。先找区域代理商申请0.1/0.25 mL试用装，用β-actin或GAPDH siRNA验证敲低再加目的基因，避免浪费。

原代神经元我建议把‘毒性低的试剂’和‘转染后的换液时间’一起优化，不要只依赖品牌。很多死亡是转染复合物长时间暴露造成的。可以试转染后1.5-2 h用全培养基半量换液，并且每孔siRNA 50nM但试剂减到说明书最低量。品牌上，Thermo的RNAiMAX、Mirus的TransIT-siQUEST和Biontex K2都有原代神经案例，先申请试用装，拿细胞活性试剂盒和qPCR同时验证，不要只看转染荧光。

原代神经元真的挑试剂，建议先拿不重要的孔试毒性，siRNA浓度也要梯度摸。

同求，之前用一个试剂做原代，细胞形态都变了，不敢再试。