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全部回答5
G
Gene8087
2026-09-24
要判断是不是RNA里的抑制物，可做掺入实验：取你提取的植物RNA与细胞系或已知良好RNA混合，一同逆转录并做qPCR。若已知RNA信号被显著拉低，说明你的RNA中确有抑制逆转录的成分。此实验比直接换酶更有针对性，能避免样品浪费。若抑制明显，优先纯化RNA；若抑制轻微，再考虑选耐受型逆转录酶或调整反应体系。
O
Oscar1093
2026-08-30
植物叶片RNA纯度看OD 260/280好，不代表多糖多酚已除净。建议先做琼脂糖或非变性胶电泳，看28S/18S条带是否清晰、有无高分子量或滞留在孔内的糖类；重点看260/230比值，若明显低于1.8，提示多糖多酚或盐残留。也可取1-2ul RNA跑胶后染色看胶孔是否有糖蛋白拖带。分光光度计对低浓度和有紫外吸收的杂峰会掩盖问题。
L
LeoElisa336
2026-09-05
珍贵样品建议一次做多个对照：提取RNA做no-RT、植物内参基因、已知阳性DNA/cDNA、不同RNA稀释度。若no-RT有信号说明gDNA污染；若阳性对照正常、植物cDNA无信号，则抑制来自逆转录步骤或RNA质量；若稀释后信号反而出现，说明抑制物浓度下降。这样能快速定位问题，避免反复浪费叶片。预算允许时选耐受抑制剂的酶，但一定配合纯化和对照一起做。
T
Tom
2026-09-20
多糖多酚严重时，耐受抑制剂的逆转录酶会有帮助，但不建议把希望全放在换酶上。可以先用针对多糖多酚的提取方案：CTAB法、改进Trizol加高盐/氯仿抽提、LiCl选择性沉淀RNA，或纯化柱二次过柱。若RNA已提出但怀疑有残留，可用75%乙醇洗涤2-3次，或加1/10体积的3M NaAc（pH5.2）再沉淀。纯化后再做逆转录，往往比单纯换酶稳定。
S
SampleTech
2026-09-24
选酶时关注耐热型或经过改造的M-MLV，通常比普通M-MLV对植物抑制物更耐受。可尝试在逆转录体系中加入BSA，常见终浓度0.1-1 μg/μl，它可吸附多糖多酚等抑制物；也可降低RNA上样量，因为减少RNA的同时也减少杂质。反应温度可提到50-55°C，预变性65°C 5分钟。若内参基因都扩不出，先不要继续加大酶量，先排查体系。
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