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全部回答5
D
DavidCell6299
2026-08-29
1%多聚甲醛固定后次日上机可行，PE是常规小分子荧光素，对固定较耐受，通常分群变化不大。但固定会改变FSC/SSC，可能使细胞轻微缩小、碎片略增。建议染色洗涤后一部分新鲜上机作为基线，另一部分固定后4℃避光，次日再测，比较CD19+阳性比例和MFI。如果PE荧光没有明显下降、CD19+群仍清晰，就可以固定；若下降明显，则尽量当天上机或改用固定时间更短。
S
ScienceBase
2026-08-31
抗人CD19-PE滴定的起始浓度建议从10 μg/mL开始，商品化PE抗体常见0.2-1 mg/mL原液，先稀释到合适工作液。可以设8个浓度：10、5、2.5、1.25、0.625、0.312、0.156、0.078 μg/mL，用100 μL体系染5×10^5 PBMC。CD19在B细胞上表达较强，通常0.1-0.5 μg/mL就能饱和，但需实测。另设0 μg/mL作为背景管。
吴
吴伟刚6095
2026-09-01
每管5×10^5 PBMC完全够做滴定，但如果设8个浓度+复孔，总细胞需求约8-16×10^6 PBMC。临床样本少时可以先做单孔，重点在操作稳定；若样本够，在预计最优浓度附近设2个复孔确认重复性。复孔不是滴定必需，更多是验证操作误差。注意每管细胞数尽量一致，最好来源于同一份PBMC混匀后分装，避免供者间差异干扰浓度效应。
曹
曹磊
2026-09-22
用含0.5% BSA的PBS做稀释液，现配现用，避免把抗体稀释后长时间存放。推荐96孔U底板，每孔50-100 μL体系，细胞5×10^5足够。加抗体后4℃避光孵育30 min，用200 μL washing buffer洗两次。稀释时要精确，尤其低浓度点，建议先配2×浓度再与细胞悬液等体积混合，减少移液误差。滴定实验每个浓度至少1管，中间浓度可做duplicate。
E
Extracting
2026-09-09
滴定结果不要只看阳性百分比，建议计算信噪比：CD19+ B细胞MFI除以CD19- T细胞MFI，或者用染色指数（阳性MFI-阴性MFI）/（2×阴性SD）。绘制浓度-信噪比曲线，选取进入平台期且背景开始升高前的最低浓度，通常就是最佳工作浓度。记录该浓度和抗体lot，后续批量实验按此稀释。注意区分B细胞和浆母/浆细胞CD19弱表达，设门时淋巴细胞群体一致。
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