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全部回答5
S
SamSample
2026-09-17
乳化一定要判断油包水状态。蛋白溶液和CFA或IFA体积比1:1，连接两个玻璃或塑料注射器，用三通阀来回推，冰上操作。推至阻力明显，滴一滴到冷水表面不散开，呈乳白色液滴即可。若蛋白体积太小，先用生理盐水或PBS稀释到合适体积再乳化，不要用含高浓度盐或去污剂的溶液。乳化后1小时内用完，剩余不要留。
C
Cell4335
2026-08-27
如果担心免疫原性弱，佐剂可以选CFA/IFA，这类经典佐剂对多抗制备仍然比较强。也可以先做小量抗原与佐剂混合测试，别一上来就用完。纯度90%里的杂蛋白也可能被免疫，后续多抗可能有杂抗体；若下游需要高特异性，可在采血后用抗原亲和柱纯化。免疫剂量在20~50 μg区间通常足够，关键是乳化质量和加强针间隔。
D
David4061
2026-09-07
注射途径我推荐皮下多点，而不是腹腔。皮下每只可在背部和两侧分4~6个点，每点50 μL左右，能增加抗原递呈、减少局部溃疡。腹腔虽然操作快，但对可溶抗原的抗体反应未必更好，而且油佐剂腹腔注射后动物状态可能受影响。如果蛋白免疫原性弱，可以首免用CFA，后续用IFA，不要每次都上CFA。
曹
曹刚1426
2026-09-06
500 μg纯度90%做4只Balb/c是够的，但要精打细算。建议4只小鼠：首免每只30~50 μg，与等体积CFA乳化；第14、28天各用15~25 μg加IFA加强。4只总计首免最多200 μg，两次加强约160 μg，加上乳化损耗，仍有余量做包被和滴度检测。如果想做5只，首免降到20~30 μg，加强10~20 μg。不要一次把全部蛋白打进去，小剂量多次加强对抗体亲和力更有利。
A
Assay8614
2026-09-12
别等到最后才测滴度。二免后10天左右用尾静脉采血，血清或血浆做ELISA，包被0.5~1 μg/mL原抗原，测系列稀释二抗。若滴度只有几千，可以追加三免或换成少量水相再加强。最终采血前建议禁食；心脏采血或眼眶采血一次可得0.4~0.7 mL血。500 μg蛋白要留30~50 μg包被ELISA板，别全打进小鼠。
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