HEK293T转染质粒用哪款转染试剂效率高且细胞毒性低？

我们实验室之前也一直用某进口脂质体，293T状态差多半是转染后没有及时换液或者试剂/DNA比例偏高。现在换国产的两款做过对比，10 cm皿20 μg质粒按1:2.5～1:3体积质量比，转染后4-6小时换完全培养基，细胞活率明显更好。国产现货多，货期基本3-5天，单皿成本比进口便宜不少。建议先让厂家给试用装，用GFP质粒在293T上摸比例，不要直接上慢病毒包装。

国产商业化转染试剂这两年进步很大，我们换过一款以PEI为基础改性、专门做病毒包装的，10 cm皿用量约40-60 μL/皿，成本大概是进口脂质体的三分之一不到，货期现货或一周内。建议先买小包装做3次重复，重点考察批间差和细胞活率。有些便宜国产试剂线性范围窄，20 μg质粒时容易饱和，可做20/24/28 μg质粒梯度，但你这需求固定20 μg也行。效率可以接受后，再谈大包装价格会更稳。

国内现货供应商主要看是否提供HEK293T慢病毒包装实测数据。我一般会要求三点：一是提供0.1-0.5 mL试用装；二是给出10 cm皿、20 μg质粒的推荐用量和换液窗口；三是能否提供批间稳定性或连续几批包装数据。对比时用旧试剂和新试剂做平行实验，固定质粒总量和比例，72小时收毒，测p24或转导293T的滴度，同时记录转染后24 h细胞存活率。这样选出的试剂才是适合病毒包装的，而不是只凭GFP阳性率判断。

293T转染前细胞融合度控制在70-80%很关键，太密或太稀转染后容易飘。20 μg质粒在10 cm皿如果试剂毒性大，可把质粒和试剂分别用Opti-MEM或DMEM稀释，混匀后室温静置15分钟，不要超过30分钟。转染后4-6小时换新鲜完全培养基，比过夜换液对293T状态更友好。我们会避免在转染当天使用含血清培养基配复合物，也尽量不加双抗。先把这些操作固定下来，再比较不同试剂会更有意义。

慢病毒包装不能只看转染效率，包装滴度和细胞状态才是关键。我们一般用PEI 25kD做对照，商业化试剂建议平行收毒测滴度。建议关注试剂是否适合10 cm皿20 μg质粒这种较高DNA量体系，有些试剂在这个条件下复合物粒径变大，对细胞膜压力大。可以找厂家要293T/293FT慢病毒三质粒或四质粒包装数据，最好有完整质粒比例和换液方案。质粒内毒素建议控制在0.1 EU/μg以下，否则换试剂也很难改善细胞状态。