胎牛血清放-20还是-80能保存更久？分装后反复冻融影响大吗？

长期储存我建议优先按说明书来，Gibco南美胎牛血清常规是-20℃避光保存，一般放标示有效期没有问题。我们实验室-20放到标示效期内没有明显问题，但前提是不要整瓶反复冻融。-80不是必需，如果放进-80反而要更注意化冻时结冰膨胀和沉淀析出。你刚批号到货，又有-20冰箱，没必要为这个换设备。分装成50ml离心管是标准做法，注意每管留15%-20%空间，化冻时别用太烫的水。

分装时我建议按1-2周用量来，不要只用50ml大管，如果有5-10ml无菌冻存管更好，避免解冻后用不完又舍不得丢弃。反复冻融两次不一定马上不能用，但不建议作为常规，尤其对比较脆的贴壁细胞，如原代、MSC、部分肿瘤株，可能出现恢复慢、克隆形成下降。建议设置同期对照：取一支只冻融一次的血清和未冻融的新鲜血清做小规模对比。已经到货、货期紧，只要把批次信息留好，按-20规范保存，先做个支路测试更稳妥。

实际用下来，-80保存会出现轻微絮状或片状沉淀，尤其在化冻慢的时候，但这些沉淀多数是脂蛋白/纤维蛋白类，低速离心后可去除大部分，并不一定代表质量差。-20保存同样会有少量沉淀。关键是化冻方式：提前一天放4℃，或室温水浴晃动化开，不要反复冻融。你分装后每支只解冻一次，细胞贴壁影响一般不大；如果同一支再冻回去两次，增殖或贴壁可能受影响，尤其原代和干细胞敏感。