LPS配液后放-20保存，反复冻融会影响给小鼠打的效果吗？

LPS低温本身不容易化学降解，但反复冻融会改变其胶束结构，增加管壁吸附，造成实际注射量下降或局部浓度异常。如果实验死亡率波动大，可以做个简单控制：同批小鼠分别用新鲜配置和冻融3次的母液注射，观察体温和存活率差异。若不想额外做动物，也可用鲎试剂检测内毒素活性，但动物反应更直接。重点还是规范分装，不要把整瓶母液反复冻融，分装后每管只解冻一次。

冻存母液取出后放4℃或室温缓慢解冻，不要用热水或微波。完全融化后涡旋5-10秒，再短暂离心管壁，保证均一。如果发现溶液浑浊或有絮状，可能已聚集，不建议继续用于关键实验。腹腔注射前将所需母液用无菌无内毒素PBS稀释到工作浓度，稀释后2小时内用完。小鼠脓毒症模型剂量和死亡率关系密切，建议每次都从同一批分装管取用，保证实际注射剂量一致。

保存最稳妥的做法：用无内毒素PBS或注射用水配母液，浓度不要过低，1mg/mL常用。分装前先涡旋充分，动作快一些，分装体积按每次实验所需量，如25μL/管或100μL/管，写上日期和浓度。短期几个月-20℃可以，长期或条件允许放-80℃更稳。避免使用反复开关造成温度波动的冰箱，不要把母液在4℃放置超过1周。工作液最好现配现用，注射前再从母液稀释到目标浓度。

LPS配成母液后反复冻融确实可能导致聚集和管壁吸附，尤其是低浓度时。死亡率波动大不一定全是LPS降解，更多是冻融后形成不同粒径的聚集体，注射后生物利用度不一致。我们实验室以前图省事冻融3次，结果同批小鼠反应差别很明显。建议配成1mg/mL母液后分装成单次用量，如50-100μL/管，-20或-80冻存，一次一管，不复冻。分装管用低吸附离心管，避免LPS贴壁损失。