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Techniques干细胞分离与培养

📂 细胞培养 Type ID 5006

👁 11,717 views 🗓 2026-10-12 Source ID：578

干细胞分离与培养

Source: Yeasen Biotech ｜ Original: https://www.yeasen.com/solutiondetail/578 ↗

骨髓间充质干细胞（BMSCs）在特定诱导条件下可以分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等细胞谱系。由于BMSCs易于分离和保存，免疫原性低、肿瘤风险低、伦理争议小等优势，其在细胞治疗和再生医学领域表现广阔的应用价值。今天小翌就来给大家分享BMSCs相关知识。

▲ 图源pixabay

BMSCs细胞分离方法

差速贴壁法

概念：利用了BMSCs与骨髓中其他细胞的贴壁性能差异及酶消化敏感性差异而逐步达到纯化扩增

优点：快速、简单、经济

缺点：细胞纯度相对不高

密度梯度离心法

概念：针对骨髓中不同细胞的大小和密度差异进行分选。

优点：非常经济

缺点：分选的细胞特异性有限，操作较难掌握

流式细胞荧光分选法( FACS)

概念：基于细胞表面标志物的分选方式主要通过特异性识别BMSCs上的表面抗原而针对性筛选出目的细胞

优点：分选所获细胞的纯度更高，也可以同时对多个表面标志物乃至细胞内标准物进行识别

缺点：操作较复杂，对实验要求高，价格昂贵，细胞通量低而分选时间长，对细胞活性影响相对较大

免疫磁珠分选法( MACS)

概念：基于细胞表面标志物的分选方式主要通过特异性识别BMSCs上的表面抗原而针对性筛选出目的细胞

优点：操作简单而快速，细胞通量高，成本相对低，对细胞活性影响低

缺点：无法同时标记两个或多个生物标志物

BMSCs细胞鉴定

• 在体外标准培养条件下，细胞必须是呈梭形形态的黏附细胞。

• 通过流式细胞术检测，细胞表面抗原表达CD105，CD73和CD90必须≥95%，同时表达CD45、CD34、CD14或CD11b、CD79α，或CD19和HLA － DＲ必须≤2%。

• 细胞在标准体外分化条件下能够分化为成骨细胞、脂肪细胞和成软骨细胞。

BMSCs细胞培养

培养的难点在于保持细胞活性，不同种属来源的BMSCs在体外培养扩增方法基本相似，但是细微的营养条件、培养环境等差异都将会对细胞性能产生影响。

▍ 培养条件

培养条件
胎牛血清	同源性血清，多为10%
培养基	90%高糖DMEM
生长因子	人血清、血浆、血小板衍生生长因子、TGF-β1、IGF等
谷氨酰胺	在低糖低氧培养而又所需能量比较高时，可以作为BMSCs生长的补充能量来源
空气条件	5% CO₂，95% AIR
支原体检测试剂	检测是否有支原体污染

▍ 消化、传代、冻存

接种密度	2000～5000个/ cm²
消化	一般贴壁细胞可使用Accutase细胞消化液
冻存液	培养基50%、血清40%、DMSO 10%

在细胞分离、鉴定、培养过程中，需要注意细胞是否受到支原体污染，支原体污染发生的频率很高，但常常被研究者忽视，原因在于支原体污染的培养液可能不发生混浊的现象，这就导致了很难被肉眼所观察到。被支原体污染的细胞生长变慢、状态变差，虽不会马上致死，但会影响其机体内的各种参数。

精品推荐

▍Yeasen 40612只要一步法即可检测支原体的存在

Yeasen一步法恒温支原体检测试剂采用独有的等温扩增技术，在颜色判别方面具有更强的辨识度，由蓝紫色（阴性）向天蓝色（阳性）的变，更利于肉眼的判别，增加了防污染组分，杜绝假阳性现象的存在。

▲ 图2.一步法支原体检测操作流程

▍结果是阳性，别怕！Yeasen 40607帮你搞定

MycAway™ 支原体去除试剂（1000×）是一种混合制剂，可通过抑制 DNA 和支原体生长所必须的相关蛋白合成来取得良好的支原体清除效果且对细胞无伤害，最大程度上挽救您的细胞，减少因支原体污染带来的损失。

去除前

去除后

▲ 图3.Yeasen MycAway™ 支原体去除效果的展示

▍支原体去除试剂的特点

• 毒性低：对细胞毒性小，不影响后续细胞实验，如细胞活力检测和细胞转染等；

•稳定性强：-20℃试剂能较长时间保存并保持高效用；

•操作简单：只需将产品添加至支原体污染的培养基中孵育即可；

•起效快：最快3天即可见效；

•去除范围广：能去除实验室绝大多数支原体类型。

▲ 图4.支原体去除试剂细胞毒性检测图示

产品信息

类别	产品	货号	规格
支原体检测	GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit GMyc-PCR 支原体检测试剂盒	40601ES10/20	10/20 assays
支原体检测	MycAway™ Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit 一步法快速支原体检测试剂盒	40612ES25/60	25/100T
支原体去除试剂	MycAway™ Spray (Ready-to-use) 支原体喷雾剂（即用型）	40605ES02/03	1 / 2×500 mL
支原体去除试剂	MycAway™ Treatment (1000×)-Mycoplasma Elimination Reagent MycAway™ 支原体去除试剂（1000×）	40607ES03/08	1/ 5×1mL
支原体预防试剂	MycAway™ Prophylactic (2000×)-Mycoplasma Prevention MycAway™ 支原体预防试剂（2000×）	40608ES03/08	1/5×1 mL
	MycGuard™-1 Solution (100×), for Disinfecting Water Bath of CO2 Incubator 细胞培养箱水盘1号消毒卫士	40609ES60	100 mL
	MycGuard™-2 Solution (500×), for Disinfecting Ordinary Water Bath 水浴锅2号消毒卫士	40610ES60	100 mL

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Source: Yeasen Biotech

Original URL: https://www.yeasen.com/solutiondetail/578

Source ID: 578

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