News翌圣琼脂糖——直击电泳痛点,跑出一手好胶
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法,包括制胶、点样、电泳,分析原理与其他支持物电泳最主要区别是它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。将凝胶置于电场中,带电荷的核酸通过凝胶网孔向正极迁移。在不同条件下电泳适当时间后,大小、构象不同的核酸片段将处在凝胶不同位置上,从而达到分离的目的。
直击电泳痛点,跑出一手好胶
琼脂糖(Agarose)是纯化的线性半乳聚糖亲水胶体,提取自琼脂或者含琼脂的海藻,结构上是一种线性聚合物,由β-D-吡喃半乳糖(1-4)连接3,6-脱水α-L-吡喃半乳糖基构成。作为一种凝胶试剂,常用于通过凝胶电泳或者印迹法(如Northern或Southern)来进行日常核酸分析,也适用于蛋白应用,如辐射状免疫扩散(RID)实验。
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法,包括制胶、点样、电泳,分析原理与其他支持物电泳最主要区别是它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。将凝胶置于电场中,带电荷的核酸通过凝胶网孔向正极迁移。在不同条件下电泳适当时间后,大小、构象不同的核酸片段将处在凝胶不同位置上,从而达到分离的目的。

图1.核酸电泳实验操作步骤

图2.电泳迁移方向图

如何选购合适的琼脂糖?

1、根据琼脂糖的基本参数进行判断
1)硫酸盐含量(sulfate content)——纯度指标;
2)凝胶强度(gel strength)——施加于凝胶使之断裂的外力;
3)胶凝点(Gel point)——水溶性琼脂糖溶液冷却后形成凝胶时的温度;
4)电内渗(EEO)——液体穿透凝胶的一种电动运动。琼脂糖凝胶内的阴离子基团吸附在基质上不会发生迁移,但是解离的阳离子就会朝负极迁移,从而产生电渗。由于样本的电泳迁移通常是朝正极移动,因此EEO产生的内部对流会干扰分离效率。
根据琼脂糖的基本参数,优质的琼脂糖凝胶应该胶孔清晰、胶体不易断,具备纯度高(硫酸盐含量低)、凝胶强度大、胶凝点相对高(常温条件下凝固快)、电内渗低等特点。
2、根据琼脂糖的分离范围进行判断
琼脂糖凝胶的分离范围较广,常用于DNA切胶回收、DNA分离和用于佐证DNA是否重组、质粒等是否切开。不同大小的目的片段也对应着不同大小的琼脂糖浓度,根据高浓度适合分离小片段原则,可参考下表找到合适自己的最佳胶浓度。
琼脂糖浓度% | ≥3 | 2-3 | 1-2 | 0.7-1 | ≤0.7 |
分子大小bp | ≤200 | 200-700 | 700-1500 | 1500-5000 | ≥5000 |

翌圣高质量琼脂糖

覆盖多种应用场景,满足您的需求

产品名称 | 产品货号 | 产品规格 | 应用场景 |
Agarose琼脂糖 | 100 g/500 g | 常规核酸电泳 | |
Low Melting Point Agarose 低熔点琼脂糖 | 25 g/100 g | 适用于大于1 kb核酸分离、细胞培养和病毒空斑实验等 | |
3:1Agarose 3:1琼脂糖 | 25 g/100 g | 小片段DNA(1 kb以下)具有很高的分辨率,可配高达5%的凝胶 | |
High Sieving Agarose 高分辨率琼脂糖(PCR级) | 5 g/25 g | 适宜分离20 bp-800 bp的DNA片段,效果与聚丙烯酰胺相当 | |
Agarose Tablets 琼脂糖(片剂,0.5 g/片) | 1盒(200片) | 应用常规琼脂糖,无需称量更方便 |

产品优势

电渗值低(EEO≤0.13),条带分离效果好,分得开;跑得快

图2.不同浓度凝胶电泳图
注:0.75%琼脂糖凝胶上样:1kb ladder,1%琼脂糖凝胶上样:100 bp ladder、1kb ladder、2000 DNA Marker、5000 DNA Marker,2%琼脂糖凝胶上样:100 bp ladder、2000 DNA Marker、5000 DNA Marker;上样量:Marker 原液 2 μl 稀释 5 倍后上样 10 μl;0.75%、1%、2%琼脂糖凝胶电泳程序分别为: 115V,45min; 130V,40 min; 130V,50 min。
胶孔清晰直挺,凝胶强度大,不易断裂

注.图示为翌圣琼脂糖10208ES60产品展示图。
高质量琼脂糖使用方法
琼脂糖凝胶浓度通常在0.7%至2%之间选择。浓度越高,凝胶的分子孔径越小,DNA迁移速率越慢,分辨率越高。反之,浓度越低,DNA迁移速率越快,分辨率较低。针对实验目的不同,选择合适的凝胶浓度与适配的电泳缓冲液。
琼脂糖浓度 | 有效分离范围(bp) | 推荐缓冲液 |
0.5% | 2,000-50,000 | 1×TAE |
0.8% | 800-10,000 | 1×TAE |
1.0% | 400-8,000 | 1×TAE |
1.2% | 300-7,000 | 1×TAE |
1.5% | 200-3,000 | 1×TAE/0.5×TBE |
2.0% | 100-2,000 | 1×TAE/0.5×TBE |
3.0% | 25-1,000 | 0.5×TBE |
TAE缓冲液:TAE缓冲液含有乙酸(Acetic acid)、EDTA和Tris,适合用于快速电泳和大片段DNA的分离。乙酸的存在降低了凝胶的pH值,有助于提高电泳速度。
TBE缓冲液:TBE缓冲液含有硼酸(Boric acid)、EDTA和Tris,其离子强度较高,适合用于小片段DNA的高分辨率分离。硼酸根离子的存在增强了凝胶的稳定性,有助于提高分离效率。因此凝胶浓度大时,需采用TEB缓冲液,便于分离条带。
琼脂糖片剂(10226ES)使用方法
按0.5g/片剂将适量琼脂糖片剂(10226ES)在缓冲液中浸泡2-3 min使之完全崩解,之后按照常规琼脂糖配制方法操作即可。请参考下表:
凝胶浓度% | 1片(0.5g/片剂) | 2片(0.5g/片剂) | 3片(0.5g/片剂) |
1% | 50 mL | 100 mL | 150 mL |
2% | 25 mL | 50 mL | 75 mL |

已发表文献(部分)


相关产品选择指南

产品定位 | 产品名称 | 产品货号 | 产品规格 | 应用场景 |
核酸染料 | Goldview Nucleic Acid Gel Stain (10,000×) | 1 mL | 特别适合大于1kb的片段检测 | |
YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) | 500 μL | 水溶,与EB具有相同的光谱特性,300 nm处紫外光激发检测 | ||
YeaRed Nucleic Acid Gel Stain(10,000× in DMSO) | 500 μL | DMSO溶液,300 nm处紫外光激发检测 | ||
YeaGreen Nucleic Acid Gel Stain (10,000×in Water) | 500 μL | 适用于使用471 nm激发的紫外凝胶成像透射仪或可见光凝胶透射仪 | ||
琼脂糖电泳 DNA Marker | GoldBand DL2000 DNA Marker | 100 T/10×100 T | 100-2000 bp | |
GoldBand DL600 DNA Marker | 100 T/10×100 T | 100-600 bp | ||
GoldBand DL5000 DNA Marker | 100 T/10×100 T | 100-5000 bp | ||
GoldBand DL10,000 DNA Marker | 100 T/10×100 T | 100-10,000 bp | ||
GoldBand 100bp DNA Ladder | 100 T/10×100 T | 100-1,500 bp | ||
GoldBand 1 kb DNA Ladder | 100 T/10×100 T | 250-12,000 bp | ||
GoldBand Full-Scale DNA Ladder | 1 mL | 100-12,000 bp | ||
GoldBand DL15000 DNA Marker | 100 T/10×100 T | 250-15,000 bp | ||
GoldBand 50 bp DNA Ladder | 100 T/10×100 T | 50-1000 bp | ||
GoldBand 100 bp plus DNA Ladder | 100 T/10×100 T | 100-3000 bp | ||
GoldBand 200 bp DNA Ladder | 100 T/10×100 T | 200-5000 bp | ||
GoldBand 500 bp DNA Ladder | 100 T/10×100 T | 500-5000 bp |
Not listed yet IMG 3:1Agarose 3:1琼脂糖
Not listed yet IMG Low Melting Point Agarose 低熔点琼脂糖
Not listed yet IMG High Sieving Agarose 高分辨率琼脂糖(PCR级)
Not listed yet IMG Agarose Tablets 琼脂糖(片剂)
Not listed yet IMG SYBR Green I (10,000× in DMSO)
Not listed yet IMG RTGreen nucleic acid gel stain, 20× conc...
Not listed yet IMG YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× i...
Not listed yet IMG YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× i...
Not listed yet IMG YeaGreen Nucleic Acid Gel Stain (10,000×...
Not listed yet IMG EveGreen (20× in water) EveGreen(20×水溶液...
Not listed yet IMG Goldview Nucleic Acid Gel Stain (10,000×...
Not listed yet IMG GoldBand 50 bp DNA ladder
Not listed yet IMG GoldBand DL10000 DNA Marker
Not listed yet IMG GoldBand DL600 DNA Marker
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