Applications单细胞表观测序中的抗体应用

传统批量蛋白检测对混合细胞样本进行整体信号读取，无法区分细胞群体内部的表达差异。单细胞表观测序依托寡核苷酸标记抗体体系，可在单个细胞水平同步定量多种蛋白标志物的表达量。与单细胞转录组相比，转录组仅反映基因转录水平，而蛋白表达结果能更直观地体现细胞功能状态、信号通路激活程度、分化表型与翻译后修饰情况。

该技术全程依赖特异性抗体完成靶标蛋白捕获，是当前多组学联合解析生物分子机制的常规实验方案。

翌圣生物HiSpecif®基于单B细胞的高通量抗体发现平台，采用光导芯片微腔中操作和培养单B细胞，在芯片上直接完成单B细胞抗体表达、抗原结合及功能测试，将抗体药物早期发现时间从4-6个月缩短至最快1.5个月，大幅度地加快了开发进程，且可适用于鼠、兔、鸡等多种属的抗体制备。

一、单细胞表观测序应用于机制研究的四大优势

1. 区分细胞异质性，识别稀有功能亚群

肿瘤组织、免疫组织、干细胞群落内部细胞功能存在明显分化，混合样本检测仅能获取均值数据。单细胞表观测序可分离耐药肿瘤细胞、耗竭型T细胞、静息干细胞等占比偏低的细胞亚群，精准定位介导疾病进程的关键细胞群体。

2. 联合转录组数据，验证转录后调控机制

现有研究数据显示，mRNA与对应蛋白表达丰度的相关性通常较低（多数研究报道相关系数在0.4~0.6之间），蛋白降解、翻译抑制、蛋白修饰均会造成二者表达水平偏差。联合单细胞转录组并行检测，可直接验证翻译调控、通路活化、表观调控等分子作用机制。

3. 多靶点同步检测，缩减实验周期与样本用量

单次实验可搭建包含数十种蛋白标志物的检测面板，同步完成细胞分型、免疫检查点表达、干细胞干性判定、代谢通路活性、细胞增殖状态等多维度检测，一次性构建组织细胞蛋白表达图谱，大幅减少分次实验的样本损耗与时间成本。

4. 适配多类型实验样本，支撑基础与临床转化研究

检测体系兼容新鲜原代细胞、外周血、骨髓、新鲜手术组织，适用于基础机制探究与临床病理、靶向治疗转化类课题。

图片来源：Shahi P, Kim S. Abseq: Ultrahigh-throughput single cell protein profiling with droplet microfluidic barcoding.

二、各研究方向检测靶点与机制研究内容

（一）肿瘤微环境、癌变及药物耐药机制

该方向为单细胞表观测序应用范围最广的研究领域，主要围绕肿瘤恶性表型、免疫抑制微环境、上皮间质转化（EMT）、靶向耐药开展机制验证。

1、肿瘤细胞分型与侵袭干性表型检测：

采用EPCAM、VIM区分上皮与间质表型细胞；SNAIL、SOX4用于EMT通路活性判定；Ki-67、PD-L1、EGFR用于三阴性乳腺癌预后评估；CD44、CD133标记肿瘤干细胞，筛选高侵袭、高复发潜能亚群。

► 肿瘤干细胞干性标记 CD44 Mouse mAb Cat#773155ES

2、免疫检查点与肿瘤免疫逃逸机制验证：

PD-1、PD-L1、CTLA4、LAG3、TIM3检测T细胞耗竭状态；FOXP3标记调节性T细胞；CD68、CD163、CD86区分M2抑制型与M1抗肿瘤型巨噬细胞，明确肿瘤免疫抑制微环境形成机制。

► 免疫检查点、T细胞耗竭检测 PD-L1 Rabbit mAb Cat#38124ES

3、代谢重编程与靶向耐药机制分析：

HK2、MCT1分别检测糖酵解与乳酸转运代谢水平；Ki-67定量细胞增殖活性；KRAS G12D识别携带驱动突变的肿瘤细胞亚群，解释靶向药物耐药的细胞起源。

（二）免疫细胞分化、炎症及自身免疫病机制

1、造血干祖细胞分化谱系绘制：CD34标记造血干细胞，H1F0为辅助标志物；CA1标记红系细胞，CD61标记巨核系细胞；MPO、AZU1用于髓系分化早期细胞；CD123、PRG2用于嗜酸、嗜碱性祖细胞判定，完整构建造血细胞层级分化调控网络。

2、免疫细胞亚群功能分析：CD45作为全免疫细胞通用标记；CD4、CD8区分辅助T与细胞毒性T细胞；FOXP3鉴定Treg细胞；CD56、CD16标记NK细胞；CD19、IGHG1识别B细胞与浆细胞；CD11c、HLA-DR标记树突状细胞，分析炎症与自身免疫疾病中各免疫细胞功能紊乱机制。

（三）干细胞发育分化与表观调控机制

1、多能干细胞干性维持检测：OCT4、SOX2、NANOG为干性核心转录因子；H3K4me3、H3K27me3检测组蛋白修饰水平，分析染色质表观修饰对干细胞分化命运的调控作用。

2、三胚层谱系分化标记检测：GATA4标记内胚层，HAND1标记中胚层，MAP2标记外胚层；搭配组织特异性蛋白，记录分化过程蛋白时序表达变化，筛选调控细胞定向分化的关键分子靶点。

► 内胚层谱系标记 GATA4 Rabbit mAb Cat#767126ES

（四）神经退行性疾病、心血管损伤修复机制

1、脑组织细胞分型与神经炎症机制：MAP2标记成熟神经元，TH特异性标记多巴胺能神经元；GFAP、IBA1分别标记星形胶质细胞与小胶质细胞；CXCR3检测炎症趋化信号，解析神经炎症介导的细胞损伤通路。

2、心血管组织重构与纤维化损伤机制：CD31标记血管内皮细胞，cTnT标记心肌细胞，VIM标记成纤维细胞；TGF-β检测纤维化通路激活水平，研究缺血后心肌重构、心衰脏器纤维化发生机制。

► CD31 Rabbit pAb Cat#772950ES

实验贴士：单细胞表观测序对抗体的特异性要求极高，建议选择经WB和IHC双重验证的克隆，并在预实验中设置同型对照（Isotype Control）排除非特异性结合。

三、单细胞表观测序机制研究配套抗体清单

1. 免疫细胞分型专用抗体

2. 肿瘤、EMT及免疫检查点抗体

3. 干细胞分化与表观修饰抗体

4. 神经、心血管组织特异性抗体

5. 代谢与信号通路通用抗体

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