Case Studies细胞转染 | PLC人肝癌细胞DNA转染案例
实验所用转染试剂试剂名称货号Hieff Trans® LipoBooster 3000 Transfection Reagent Lipo3000转染试剂40801ES细胞培养与传代(T25)润洗:吸弃旧培养基,加入3-4 mL常温PBS轻晃润洗10-20秒后吸弃。消化:加入1 mL胰酶润湿瓶底,37°C孵育消化。吹落:待细胞间隙变大、形态变圆时,直接用胰酶
实验所用转染试剂试剂名称货号Hieff Trans® LipoBooster 3000 Transfection Reagent Lipo3000转染试剂40801ES细胞培养与传代(T25)润洗:吸弃旧培养基,加入3-4 mL常温PBS轻晃润洗10-20秒后吸弃。消化:加入1 mL胰酶润湿瓶底,37°C孵育消化。吹落:待细胞间隙变大、形态变圆时,直接用胰酶
实验所用转染试剂试剂名称货号Hieff Trans® LipoBooster 3000 Transfection Reagent Lipo3000转染试剂40801ES细胞培养与传代(T25)润洗:吸弃旧培养基,加入3-4 mL常温PBS轻晃润洗10-20秒后吸弃。消化:加入1 mL胰酶润湿瓶底,37°C孵育消化。吹落:待细胞间隙变大、形态变圆时,直接用胰酶
实验所用试剂清单试剂名称货号Hieff Trans® LipoBooster 3000 Transfection Reagent Lipo3000转染试剂40801ES细胞培养与传代(T25)润洗:吸弃旧培养基,加入3-4 mL常温PBS轻晃润洗10-20秒后吸弃。消化:加入1 mL胰酶润湿瓶底,37°C孵育消化。吹落:待细胞间隙变大、形态变圆时,直接用胰酶
实验所用转染试剂试剂名称货号Hieff Trans®RNAiBoost Transfection Reagent转染试剂40807ES细胞培养与传代(T25)细胞计数:从培养箱取出细胞,细胞悬液吹打混匀,使用细胞计数仪检测细胞活率及密度。细胞传代(直接稀释法):根据计数结果,将细胞按照5E5 cell/mL左右进行细胞传代。细胞传代(半换液法):若待传代细胞
RNA作为实验室常研究的样本,其质量的高低会直接影响实验数据的质量。一般在RNA提取过程中无法完全避免gDNA残留,因此,在进行对RNA纯度要求较高的实验之前,通常建议对RNA样本进行DNase I处理,消化残留的gDNA。消化gDNA步骤可以在RNA提取期间、RNA提取后或者RNA反转录之前进行。需提前去除gDNA的实验一般包括:mRNA表达量分析、转录组
在生物体内,rRNA丰度高且非常保守,其对于获取生物信息研究意义不大。然而,实验过程中提取到的总RNA中有95%是人源rRNA,这些rRNA的存在可能会干扰靶标RNA的检测。因此,在RNA建库测序中,通常会先将rRNA去除。目前,rRNA的去除方式以RNA酶消法为主,其主要操作步骤与原理如下:图1. rRNA去除流程[2]本文基于《Nucleic Acids
在 mRNA 疫苗、体外转录 RNA(IVT RNA)、长链 RNA 制备等高端应用中,转录后残留的质粒 DNA 模板是影响 RNA 纯度、安全性与下游实验可靠性的关键污染物。尤其在 mRNA 疫苗研发(如 CureVac 新冠 mRNA 疫苗体系)中,必须严格去除 DNA 模板,避免残留 DNA 带来的免疫原性异常、假阳性扩增与生物安全风险。图1. 线性化
实验所用转染试剂试剂名称货号Hieff Trans® LipoBooster 3000 Transfection Reagent Lipo3000转染试剂40801ES细胞培养与传代(T25)润洗:吸弃旧培养基,加入3-4 mL常温PBS轻晃润洗10-20秒后吸弃。消化:加入1 mL胰酶润湿瓶底,37°C孵育消化。吹落:待细胞间隙变大、形态变圆时,直接用胰酶
实验所用转染试剂试剂名称货号Hieff Trans® LipoBooster 3000 Transfection Reagent Lipo3000转染试剂40801ES细胞培养与传代(T25)润洗:吸弃旧培养基,加入3-4 mL常温PBS轻晃润洗10-20秒后吸弃。消化:加入1 mL胰酶润湿瓶底,37°C孵育消化。吹落:待细胞间隙变大、形态变圆时,直接用胰酶
实验所用转染试剂试剂名称货号Hieff Trans® LipoBooster 3000 Transfection Reagent Lipo3000转染试剂40801ES细胞培养与传代(T25)润洗:吸弃旧培养基,加入3-4 mL常温PBS轻晃润洗10-20秒后吸弃。消化:加入1 mL胰酶润湿瓶底,37°C孵育消化。吹落:待细胞间隙变大、形态变圆时,直接用胰酶
实验所用转染试剂试剂名称货号Hieff Trans®RNAiBoost Transfection Reagent转染试剂40807ES细胞培养与传代(T25)润洗:吸弃旧培养基,加入3-4 mL常温PBS轻晃润洗10-20秒后吸弃。消化:加入1 mL胰酶润湿瓶底,37°C孵育消化。吹落:待细胞间隙变大、形态变圆时,直接用胰酶轻轻吹打下细胞。终止:加入2-3
实验所用转染试剂试剂名称货号Hieff Trans®RNAiBoost Transfection Reagent转染试剂40807ES细胞培养与传代(T25)润洗:吸弃旧培养基,加入3-4 mL常温PBS轻晃润洗10-20秒后吸弃。消化:加入1 mL胰酶润湿瓶底,37°C孵育消化。吹落:待细胞间隙变大、形态变圆时,直接用胰酶轻轻吹打下细胞。终止:加入2-3
实验所用转染试剂试剂名称货号Hieff Trans®RNAiBoost Transfection Reagent转染试剂40807ES细胞培养与传代(T25)润洗:吸弃旧培养基,加入3-4 mL常温PBS轻晃润洗10-20秒后吸弃。消化:加入1 mL胰酶润湿瓶底,37°C孵育消化。吹落:待细胞间隙变大、形态变圆时,直接用胰酶轻轻吹打下细胞。终止:加入2-3
实验所用转染试剂试剂名称货号Hieff Trans®RNAiBoost Transfection Reagent转染试剂40807ES细胞培养与传代(T25)润洗:吸弃旧培养基,加入3-4 mL常温PBS轻晃润洗10-20秒后吸弃。消化:加入1 mL胰酶润湿瓶底,37°C孵育消化。吹落:待细胞间隙变大、形态变圆时,直接用胰酶轻轻吹打下细胞。终止:加入2-3
一、为什么选择Cas9 RNP进行细胞基因敲除?CRISPR-Cas9技术已成为生命科学研究中不可或缺的基因编辑工具。在哺乳动物细胞中实现基因敲除(Gene Knockout, KO),传统方法依赖于质粒DNA(pDNA)或mRNA的递送,但这些方式存在脱靶风险高、编辑窗口不可控、需要经过细胞内转录翻译等复杂过程的问题。相较之下,直接递送Cas9蛋白与向导R
一、引言:从随机敲除到精准敲入基因敲除(KO)只能实现基因功能的"减法",而在许多研究场景中,我们需要的恰恰是"加法"或"修改"——例如在目的基因C端敲入荧光蛋白标签(GFP/mCherry/Flag/HA)、引入疾病相关点突变、插入报告基因(如luciferase)、或构建条件性敲除等位基因(floxed allele)。这就需要借助同源定向修复(Homo
一、显微注射的挑战与RNP策略优势基因编辑动物模型(如基因敲除小鼠、基因敲入大鼠、斑马鱼突变体等)是生命科学研究和药物开发中不可或缺的工具。传统的动物模型构建依赖于胚胎干细胞(ES细胞)打靶技术,周期长(通常需要12-18个月)、操作复杂、成本高昂。CRISPR-Cas9技术的出现彻底改变了这一局面——通过直接将基因编辑组分显微注射至受精卵中,可在2-3个月
一、植物基因编辑的新范式植物基因编辑在作物改良、功能基因组学研究和合成生物学中具有巨大应用前景。然而,传统的农杆菌介导转化(Agrobacterium-mediated transformation)方法需要将CRISPR-Cas9表达盒以T-DNA形式整合到植物基因组中,由此带来三个关键问题:(1) 外源DNA整合——在多个国家和地区,转基因(GMO)作物
货号40801ES40802ES40807ES40809ES40810ES40821ES40824ES40825ES40828ES40829ES40830ES产品名称LipoBooster3000转染试剂Liposomal 2000脂质体转染试剂RNAiBoost 转染试剂mRNA转染试剂昆虫细胞转染试剂PEI -GMP转染试剂UltraAAV- GMP转染
萤光素酶报告基因检测系统中具有代表性的是萤火虫萤光素酶报告基因和海肾萤光素酶报告基因,由于两种酶底物和发光颜色的区别,且在动物体内无内源性表达,使其在单、双报告实验中得到广泛应用。