Techniques全示踪/半示踪qPCR Mix原理和区别
一、为什么要示踪？实时荧光定量PCR（qPCR）是分子生物学最核心的定量工具之一。然而在日常实验中，96孔乃至384孔板的操作一直是痛点：漏加样：孔数多、布局复杂，某孔忘记加模板或Mix而不自知；错加样：同一样品加两遍，另一个样品却空着；标识困难：透明PCR板/管在白色光下难以看清液滴。示踪染料的出现，正是为了解决这些"看不见"的问题。通过在预混液中加入惰性
Techniques熔解曲线异常及原因分析
作为一名天天在实验室埋头做qpcr的科研民工来说，qPCR需要看哪些曲线哪些指标大家一定不陌生，首先，扩增曲线要是一个平滑的S型曲线，CT值15-35之间。当然，除了要看扩增曲线和CT值，熔解曲线也要看，毕竟这是判断我们的产物是否特异，实验结果是否具备可信度的一个非常明显且有效的标准。标准的熔解曲线的特性：= 单峰 + 光滑 + 峰窄，Tm值通常在80℃-9
TechniquesqPCR结果异常：如何判断是逆转录还是qPCR的问题？
每次做完qPCR,看到结果正常，长吁一口气，但是结果不正常，你是否也会开始挠头，不知道从哪分析起？最近线上收到好多小伙伴的求助：“我的qPCR结果又崩了！到底是我反转录没做好，还是qPCR本身出了问题？”今天，我们就总结一下我们日常遇见的常见案例，教大家如何迅速判断问题根源。遇到问题，先看内参内参基因（如Actin、GAPDH、18S rRNA）的结果可以反
Techniques纯干货！qPCR绝对定量操作解析
Q1：绝对定量是什么？绝对定量（Absolute Quantification）是指通过已知拷贝数的标准品构建标准曲线，根据未知样品的Ct值计算出其精确的起始模板拷贝数或浓度。Q2：绝对定量和相对定量的区别方法检测目标典型使用场景绝对定量精确拷贝数/浓度病毒载量检测、微生物绝对丰度、转基因成分定量、基因拷贝数鉴定相对定量表达倍数变化基因表达调控研究、处理组v
Techniques熔解曲线分析全攻略:如何识别非特异产物与引物二聚体
做染料法的qpcr，不要只看扩增曲线，更要看熔解曲线，熔解曲线单峰说明特异性良好，扩增结果可信。但是如果熔解曲线不是单峰，有多峰，说明可能形成了引物二聚体或者是非特异产物，也可能是试剂或者环境的污染造成的。那如何快速分辨到底属于哪种情况呢？今天教会大家一招非常使用的技巧，利用NTC反应，即可快速找到问题根源！具体操作步骤：样品反应孔：加入模板，引物,qPCR
Techniques反转录后cDNA可保存多久？与反转录试剂有直接关系吗？
在分子生物学实验中，反转录得到的cDNA需要妥善保存以确保后续实验的可靠性。关于cDNA能存放多久，以及反转录试剂的选择是否会影响其稳定性，本文将结合实测数据为实验室标准化操作提供参考。cDNA产物短期保存短期保存条件：4°C短期保存1-7天根据一些主流试剂厂商的技术规范，大部分厂商的cDNA合成产物可在4℃放置1~3天，这一时间窗口适用于实验流程紧凑、需连
Techniques逆转录实验经典灵魂拷问：到底要不要去除基因组DNA？
宝子们平时购买逆转录试剂盒的时候是不是销售都会问这么一个问题：咱们要不要去除基因组呢？这个时候你是不是也会开始思索到底要不要呢？好像以前购买的都是要去除的，那为啥要去除，不去除会咋样呢？今天咱们就从头到尾梳理一下基因组DNA是啥？为啥会存在于提取的RNA中？基因组DNA（gDNA）是生物体遗传信息的完整载体，包含所有编码和非编码序列。它存在于提取的RNA中，
Techniques逆转录试剂中的RNase抑制剂作用是什么？
说到逆转录试剂我们先来说说逆转录实验什么是逆转录？A：以RNA为模板，合成cDNA的过程。逆转录实验需要哪些要素呢？模板引物逆转录酶BufferdNTPsRNA酶抑制剂无核酸酶水关于模板，引物，逆转录酶，Buffer,dNTP这些，大家都非常明确，是作为反应过程中的要素而存在的，那RNA酶抑制剂是干什么用的呢？RNA酶抑制剂的作用是与RNase以非共价键结合
TechniquesRNA的二级结构如何成为影响逆转录效率
在进行RT-qPCR实验过程中，逆转录实验是将RNA信息“逆向”转录为cDNA的关键步骤，属于一个承上启下的实验过程，被广泛应用于基因表达分析、病毒研究和RNA测序等领域。然而，这个看似成熟的流程，实则隐藏着一个容易被忽视却又至关重要的变量——RNA自身的二级结构。1.什么是RNA二级机构？由分子内碱基配对形成的局部发夹、茎环乃至更复杂的空间折叠都可以称之为
Techniques反转录核心原理详解
逆转录（Reverse Transcription）是我们破译基因表达信息的核心工具之一。无论是做qPCR看基因表达量，还是做基因克隆，第一步都是将不稳定的RNA“翻译”成稳定的cDNA——这个过程的成败，直接决定了后续实验的走向。今天，就带大家深入理解逆转录的原理，并梳理那些决定实验成败的关键因素。一、逆转录的本质：一场“反向”的信息传递在经典的“中心法则
Techniques攻克扩增难题高GC含量，复杂二级机构，长片段的终极方案
做PCR最怕什么？模板GC含量高非常难打开，二级结构复杂怎么都扩不出，或者片段太长跑出一条弱带甚至什么都没有——这些场景遇上一个就够头疼了。Hieff Canace® Veritas Long PCR Master Mix（10166ES） 就是为这些"困难户"量身打造的终极方案。🎯三大硬核能力，专治疑难模板🔥 长片段：DNA 40 kb / cDNA 14
Techniques提高cDNA长度与产量的5个核心技巧
做反转录（RT-PCR）时，最令人沮丧的莫过于：明明提的RNA质量很好，跑胶也看到清晰的条带，但做出来的cDNA要么浓度极低，要么全长基因永远扩不出来。其实，cDNA的长度和产量，并不只取决于RNA质量，更多取决于你对反转录酶“脾气”的拿捏。以下是经过实战检验的5个技巧，帮你把cDNA的“质”和“量”都拉满。1. RNA的二级结构是长cDNA的头号天敌想要获
Applications手把手教你做出RT-qPCR最美曲线(一)：1:1提取高品质RNA
想要提取到高质量的RNA并非易事。今天，小翌主要从样本选择、样本采集与保存、RNA提取这三个方面来阐述RNA提取过程需注意的关键要点，以辅助后续的qPCR实验顺利进行。
ApplicationsTaqMan探针法qPCR原理及其主要应用
qPCR反应中有非特异性扩增产物的出现会增加荧光值，影响定量结果的准确性，而TaqMan探针法的出现很好地解决了染料法非特异性的问题。下面，我们一起来了解一下TaqMan探针法qPCR的基本原理及其主要应用。
Applications精品推荐|双管齐下,miRNA表达分析变得更加简单
MicroRNAs（miRNAs）是一种大小约21-23个碱基的单链小分子RNA,是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成。miRNA的作用涉及个体发育、组织分化、细胞增殖和细胞凋亡等多种心血管疾病的发生发展。
Applications干货分享|qPCR实验结果奇奇怪怪，怎么办？
qPCR实验说简单也简单,说不简单也不简单。完成引物设计后,像做PCR一样,按部就班地加样,上机即可完成实验。小翌在这边整理了染料法qPCR实验中几个常见的问题,并给出了可能的原因和解决方案,希望解决大家qPCR实验中的烦恼~
Applications分子生物学用缓冲液
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Applications化繁为简！小翌带你轻松搞定qPCR数据分析
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ApplicationsqPCR进阶攻略:带你玩转qPCR仪器设置！
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