技术讲解单点/多点定点突变随心变—想变哪里变哪里
—想变哪里变哪里
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献给初学者,基因功能研究时,如何在细胞内过表达基因?
质粒测序发现基因出现突变,对后续基因表达有影响吗?
提起传统酶切连接克隆或载体构建,什么让大家苦不堪言?小A:每次都要纠结于各种限制性内切酶的选择。小B:操作步骤繁琐,耗时长,至少需三四天才能完成。小C:每次只能克隆1个目的片段。小D:片段结合位置上有时会留下“疤痕”。忘记苦难,今天小编给大家介绍一种新的克隆方法 —— 一步法同源重组技术,带你们脱离苦海!一步法同源重组技术是一种利用同源序列重组的原理,进行无
攻无不“克”的无缝克隆为何备受青睐?
分子克隆知多少
常见定点突变方法分析与对比
还有实验室用EB吗?拒绝EB!用无毒核酸染料YeaRed/YeaGreen!
酶切实验的这些坑,你肯定遇到过!
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克隆是英文“clone”或“cloning”的音译,而英文“clone”则起源于希腊文“Klone”,原意是指以幼苗或嫩枝插条。1963年J.B.S.Haldane在题为“人类种族在未来二万年的生物可能性”的演讲上采用“克隆(Clone)”的术语,把“克隆技术”带到了人们的视野中。
小翌克隆课堂开课了!
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在分子克隆实验中,突变几乎是难以完全避免的问题。有时是某个碱基发生了替换,有时则会出现大片段的缺失或重排。这些突变不仅影响实验结果的可重复性,有时甚至会让我们在筛选阳性克隆时耗费大量时间。结合实验经验来看,突变主要来源于四个方面:细胞增殖过程中的自发突变、DNA序列自身的不稳定性、实验操作中的紫外线损伤,以及PCR扩增过程引入的错误。下面分别梳理它们的成因、
做分子克隆的朋友,大概都经历过这样的时刻:小心翼翼做完同源重组连接,涂板,第二天满怀期待地去看——板子上干干净净,一个克隆都没有,或者就零零散散长几个,克隆特别少。今天和大家一起,像复盘实验一样,把那些可能导致“零克隆/克隆少”的原因过一遍。下次遇到同类问题能快速排查原因。1. 引物设计:同源臂设计不理想同源臂是重组反应中识别与定位的关键序列,其设计质量直接
近年“同源重组技术”逐渐受到科研人员的欢迎,相比之下,同源重组技术操作更加简单,不受到酶切位点的限制,可一次进行多个片段的拼接,大大的提高了克隆效率。
干货 | 限制性内切酶知多少?