选购指南上新 酶切法DNA建库再进阶：产量更高，数据更优！
在肿瘤精准诊疗时代，NGS（下一代测序）已成为辅助诊断、伴随诊断、MRD监测、早筛早诊、遗传性肿瘤检测等应用场景的核心技术。而在整个NGS检测流程中，建库是至关重要的环节——建库的质量直接影响测序结果的准确性与可靠性。酶切法建库避免了传统的机械打断，无需打断仪，流程简便，可同时处理多个样本，更适合自动化建库，是目前应用最广泛的建库方法之一。然而，肿瘤样本的特
在肿瘤精准诊疗时代，NGS（下一代测序）已成为辅助诊断、伴随诊断、MRD监测、早筛早诊、遗传性肿瘤检测等应用场景的核心技术。而在整个NGS检测流程中，建库是至关重要的环节——建库的质量直接影响测序结果的准确性与可靠性。酶切法建库避免了传统的机械打断，无需打断仪，流程简便，可同时处理多个样本，更适合自动化建库，是目前应用最广泛的建库方法之一。
然而，肿瘤样本的特殊性对建库试剂盒提出了苛刻的要求，酶切法建库也存在酶切偏好性、假阳性、起始量适用范围窄等方法学局限。翌圣生物借助ZymeEditor酶改造及发酵纯化工艺平台，对酶进行进化改造，并不断优化反应体系，在经典产品的基础上全新升级，推出Hieff NGS® OnePot Evo DNA Library Prep Kit（Cat#12193ES），让酶切法建库更高效、更精准！
肿瘤NGS检测中，从提取、建库、捕获到测序，每一个环节的效率都会影响到低频突变的检出率。基于NGS的肿瘤全景变异检测，对DNA建库试剂盒有四大核心要求：
▪低质量FFPE样本、微量cfDNA样本的建库成功率高；
▪接头连接效率高、文库扩增效率高；
▪片段化带来的假阳性低；
▪扩增无偏好性。
同时，肿瘤样本类型多样 ——FFPE、血浆、胸腹水、全血 / 骨髓血，样本质量参差不齐。以 12194ES 为代表的一步法建库试剂盒已在多家三方医检所客户中稳定应用，文库产量与酶切片段化大小均表现稳定；然而，针对低质量 FFPE 样本，若希望在保障稳定性的基础上进一步提升文库产量，12193ES 应运而生。
◆产品特点：
▪适用5 ng - 1 μg的基因组DNA、全长cDNA等样本，兼容FFPE DNA样本；
▪高质量片段化酶，可随机切割双链DNA，酶切片段偏好性低；
▪片段化、末端修复/加A一步完成；
▪强扩增效率的高保真酶，显著提高文库质量及产量；
◆实验流程
优势一：文库产量显著提升
以小牛gDNA为模板，考察5 ng - 1 μg不同投入量的建库表现。
Input DNA | 5 ng | 50 ng | 500 ng | 1 μg |
cycles | 10 | 6 | 3 | 3 |
文库产量（ng） | 1530~1836 | 2634~2718 | 2814~2928 | 3120~3150 |
数据显示，12193在5 ng微量起始到1 μg高通量投入的全范围内均能获得高产量的文库。
优势二：片段大小灵活可调
以Human gDNA 200 ng为模板，进行酶切时间梯度测试（3 - 20 min），不同酶切时间对应稳定的产物大小
◆酶切时间梯度：3min、5min、7min、10min、12min、15min、17min、20min
数据显示，通过简单调整酶切时间即可精准控制文库片段大小，满足不同Panel与测序平台的插入片段需求。
优势三：捕获数据质量全面优异
▸对比SupplierA（全外显子Panel，标准品NA12878）：
| 指标 | 12193 | SupplierA |
| Properly Mapped（%） | 99.2 / 98.86 | 95.51 / 95.85 |
| Coverage（%） | 45.88 / 45.93 | 44.42 / 44.88 |
| diff chr（%） | 0.82 / 1.17 | 4.22 / 4.64 |
数据显示，12193的Properly比对率、Coverage、嵌合体比例（diff chr）显著优于SupplierA，数据指标基本一致且质量更优。
▸对比12194、Supplier B（FFPE样本靶向捕获，0.2M Panel，200 ng input，5 cycles）：
| Sample | Map Ratio (%) | Dup (%) | Reads Capture (%) | Mean Depth | Coverage (%) | 0.2 Mean Depth X Coverage (%) | Soft Clip (%) | Chimeric (%) | Hairpin Artifacts Reads | RPM |
| HYF--12193 | 99.95 | 26.83 | 80.37 | 4037.09 | 100.00 | 99.35 | 1.92 | 0.72 | 14.00 | 4.93 |
| HYF--Supplier B | 99.94 | 29.98 | 80.01 | 3900.99 | 100.00 | 99.08 | 2.11 | 0.93 | 17.00 | 6.00 |
| FG--12193 | 99.91 | 18.19 | 65.87 | 3647.78 | 100.00 | 99.57 | 2.17 | 0.78 | 20.00 | 7.05 |
| FG--Supplier B | 99.89 | 19.91 | 65.56 | 3606.87 | 100.00 | 99.24 | 2.32 | 0.92 | 24.00 | 8.47 |
| WZF--12193 | 99.95 | 29.44 | 83.13 | 3996.99 | 100.00 | 99.81 | 1.80 | 0.50 | 24.00 | 7.18 |
| WZF--Supplier B | 99.94 | 35.54 | 82.71 | 3614.11 | 100.00 | 99.86 | 2.07 | 0.82 | 23.00 | 8.13 |
数据显示，相同的样本、相同的投入量、相同的循环数，12193的文库产量最高；Map Ratio、Duplication Rate、Reads Capture率、Mean Depth、Chimeric、Hairpin Artifacts Reads等指标最佳。综合评估：12193的文库产量和数据质量整体优于Supplier B。
▸海外客户FFPE样本实测案例：
| Metric | Sample1-Supplier C | Sample1-12193 | Sample2-Supplier C | Sample2-12193 |
| Total reads (M) | 25.36 | 26.28 | 28.23 | 26.68 |
| Duplication rate | 44.89% HIGH | 32.56% PASS | 45.12% HIGH | 33.03% PASS |
| Mapping rate | 99.96% | 99.93% | 99.95% | 99.94% |
| Uniformity | 99.69% | 99.73% | 99.55% | 99.69% |
| Mean coverage | 8113× | 8703× | 9008× | 8920× |
| % On-bait | 94.3% | 94.0% | 91.8% | 94.3% |
| Fold enrichment | 5939× | 5781× | 5713× | 5829× |
| % Usable bases on-target | 19.6% | 24.3% | 18.7% | 24.3% |
| SNVs/indels reported | 5 | 5 | 9 | 9 |
| Concordant calls | 5 | 5 | 9 | 9 |
| Concordance | 100% | 100% | 100% | 100% |
数据显示，12193相比客户原有FFPE建库方案：Duplication Rate显著降低（全部通过<40%阈值）；Uniformity、Mean Coverage普遍更高，捕获效率更稳定；有效靶向碱基比例显著提升（19.6%→24.3%）；SNV一致性保持100%。
优势四：假阳性水平可控
FFPE回顾性临床样本验证（200 ng input，杂交捕获后对比）：
| 样本 | raw_mut个数 （12193 vs Supplier D） | 报告突变个数 （12193 vs Supplier D） | CNV | MSI |
| 样本1 | 11223 vs 13624 | 26 vs 26 | 一致 | 结论一致 |
| 样本2 | 12372 vs 16716 | 19 vs 19 | 一致 | 结论一致 |
| 样本3 | 1777 vs 2545 | 11 vs 11 | 一致 | 结论一致 |
| 样本4 | 2195 vs 2359 | 2 vs 2 | 一致 | 结论一致 |
数据显示，12193相对Supplier D突变检出个数更少，说明假阳性更小；回顾性样本中两种试剂报告的突变个数一致，检测到的CNV和MSI结论完全一致。
产品名称 | 产品货号 | 产品规格 |
12193ES08 | 8 T | |
12193ES24 | 24 T | |
12193ES96 | 96 T |