Applications精准干细胞培养——ELISA定量细胞因子

干细胞是一类具有无限或长期自我维持的自我更新能力的多潜能细胞，在一定条件下，可分化成多种功能细胞。未充分分化的干细胞因具有再生各类组织器官和人体的潜在功能，被称为“万用细胞”。常见干细胞培养有造血干细胞(HSC)，胚胎干细胞(ESC)，神经干细胞(NSC)，多功能干细胞(iPSC)，间充质干细胞(MSC)等干细胞培养。

表1.干细胞分化常用细胞因子

细胞因子在干细胞培养过程起到不同的调控作用。依造血干细胞(HSC)为例，多数白细胞介素在促进造血细胞增殖和诱导其分化方面发挥重要作用，如：IL-3和IL-6均是一种强效造血生长因子，在体外诱导造血前体细胞增殖方面有协同效应。G-CSF的主要作用是促进骨髓造血干/祖细胞增殖分化成粒细胞集落，能协同其他因子，促进骨髓造血干细胞(HSC)形成集落。TPO则是一个关键的生长因子，在体外培养造血干细胞过程中，与SCF连用可显著扩增造血干细胞。此外，⾎⼩板衍⽣⽣⻓因⼦PDGF-BB，可促进成纤维细胞的增殖。

图1.细胞因子与造血干细胞(HSC)培养示意图

在神经干细胞(NSC)，多功能干细胞(iPSC)，间充质干细胞(MSC)等干细胞培养过程中均需表⽪⽣⻓因⼦EGF，可向表⽪细胞发出增殖信号，进而促进细胞的新陈代谢。此类细胞因子在调节免疫系统机能、恢复细胞活性和细胞分化老化等过程中起着重要的作用，因此定量及残余检测有利于干细胞精准培养。

依据标准品实验数据通过四参数拟合方式拟合标准曲线。

图2.Human EGF ELISA Kit标曲数据与示意图

板内精密度：3个不同加标浓度样本分别在同一板子上检测10次，拟合板内差异，变异系数均值为3.1%，重复性较好；

板间精密度：3个不同加标浓度样本分别在统一批次的3个板上检测24次，拟合板间差异，变异系数均值为7.0%，重复性较好；

表2.Human EGF ELISA Kit精密度数据

分别在若干份正常人血清，人血浆和培养基等多样本下，添加梯度浓度的重组蛋白EGF，拟合计算加标回收率，均在正常范围内。

表3.Human EGF ELISA Kit各样本加标回收率数据

分别在若干份正常人血清，人血浆和培养基等多样本下，添加重组蛋白EGF做稀释线性，拟合计算稀释线性数据，均在正常范围内。

表4.Human EGF ELISA Kit各样本稀释线性数据

重复检测20次零孔OD值，计算相应的浓度来确定EGF的最低检测剂量为0.7 pg / mL。

应用本试剂盒，检测若干健康志愿者的样本进行检测。

n.d. 指样本浓度值低于检测范围内的3.9 pg/mL

试剂盒内各耗材均通过37℃放置加速实验验证，变异系数于7天加速值为93%，拟合标曲稳定正常，确定其加速稳定性效果较好。

图3.Human EGF ELISA Kit加速稳定性示意图

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