Q:
11198ES qPCR 实验结果的有效性?为什么建议Ct 值要大于 15?
(1)有效性要满足三个条件:(1)标准曲线:扩增效率范围:90-110%,对应斜率为
-3--3.5。R2>0.98。 (扩增效率=10-1/斜率-1),当斜率=-3.32 时,扩增效率=100%。
(2)扩增曲线:S 型曲线,且 Ct 值在 15-35 之间,阴性对照 Ct>35 或无Ct 值。(3) 熔解曲线:为单一峰。
(2)3-15 个循环的荧光值标准差的 10 倍是荧光阈值,Ct 值太小了会影响曲线。