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为什么出现双峰,并且较低峰 Tm 在 80℃之前?

Q:

为什么出现双峰,并且较低峰 Tm 在 80℃之前?

较低峰 Tm 在 80℃之前可能原因:存在引物二聚体(一般mRNA 反转录后定量,产物在 100-150bp 左右,峰对应 Tm 值为 80-90℃。若有引物二聚体存在,引物二聚体大小只有几十bp,峰对应 Tm 值在 70-80℃之间。故会在 80℃以前出现一个峰, 80℃以后出现一个峰),模板浓度过低或引物浓度过高。
解决方案:
适当提高退火温度; b)提高模板量,降低引物浓度; c)重新设计引物。

qPCR系列 👁 88

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