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选购指南His标签蛋白纯化产品选购指南

📂 蛋白纯化类型 ID 5001

👁 14,717 次浏览 🗓 2026-10-09 源站内容 ID：342

靶标伴“His”，蛋白纯化明明白白！

来源：翌圣生物｜原文：https://www.yeasen.com/solutiondetail/342 ↗

蛋白纯化简介

蛋白纯化是将目标蛋白从实验样本的总蛋白中分离出来，同时仍保留目的蛋白的生物学活性及化学完整性。在构建载体阶段，除了一些必要的表达元件，还需要考虑密码子优化以及标签的选择。选择合适的标签不但有利于蛋白的纯化，促进蛋白的可溶性，同时也不能影响蛋白的结构功能和下游应用。以下简单列举几个常见蛋白标签：

表1. 不同蛋白纯化标签介绍

标签	大小kDa	序列	纯度	增溶性	标签去除	标签切割酶
His	~0.84	HHHHHH	+	+	不需要	TEV蛋白酶
GST	26	由211个氨基酸组成	++	++	需要	3C蛋白酶/PSP
MBP	42	由大肠杆菌K12的malE基因编码	++	++	需要	Factor Xa、EK
Strep(Ⅱ)	1.06	Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys	++++	+	不需要	/
Flag	1.01	DYKDDDDK	++++	+	不需要	EK

浓缩的精华，纯化的领头羊

His-Tag 为何会逐渐成为分离纯化蛋白质等生物工程产品最有效的技术之一。其主要优势在于：

序列兼容性高：N-端的His-tag与细菌的转录翻译机制兼容，有利于蛋白表达；

序列小影响小：His-tag非常小，His-tag对目的蛋白本身特性几乎没有影响，不会改变目的蛋白本身的可溶性和生物学功能；且在融合蛋白结晶后对蛋白的结构也没有影响；

免疫原性低：His-tag的免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射入动物体内进行免疫并制备抗体；

联合使用性强：与其他的亲和标签构建成联合标签，可用于多种表达系统，纯化的条件温和；

适用范围广：His标签融合蛋白的适用范围也较广，即可用在非离子型表面活性剂存在的条件下纯化，也可以在变性条件下进行纯化。前者通常用来纯化疏水性强的目的蛋白，而后者通常纯化包涵体蛋白。

因此，His逐渐成为了蛋白纯化的首选标签。

His纯化树脂生产工艺

HisSep Ni-NTA Agarose Resin以高度交联的琼脂糖凝胶为基质，通过化学方法偶联四配位的氮川三乙酸（NTA）为配体，螯合镍离子（Ni2+）后，形成非常稳定的八面体结构，镍离子处于八面体的中心，这样的结构可保护镍离子免受小分子的进攻，与Ni-IDA树脂相比，更加稳定，可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件，与Ni-TED树脂相比，目标蛋白吸附量更大。已经成为实验室纯化His标签蛋白不可或缺的树脂之一。

图1. His树脂的产品原理图

表2.不同配体所构成树脂的性能比较

配体	Ni-NTA	Ni-IDA	Ni-TED
基质	琼脂糖凝胶	有机硅树脂	琼脂糖凝胶
Ni^2＋与His tag结合位数目	2	3	1
Ni^2＋与螯合物结合位数目	4	3	5
螯合物密度	最高	最低	介于前面两者之间
结合能力	≤50mg/mL	≤20mg/mL	≤10mg/mL
产品特性	对于His-Tag 蛋白具有高度专一性结合
	蛋白结合能力最强，载量最高	蛋白结合能力高于TED，低于NTA	蛋白结合能力最低
	耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件	易受其他小分子的进攻，破坏稳定结构	耐受能力最强，可以在含有高浓度的EDTA及DTT等苛刻条件下进行蛋白纯化

翌圣His纯化产品选购指南

产品货号	20502ES	20503ES	20504ES/20505ES	20561ES	20497ES	20498ES
英文名称	HisSep Ni-NTAAgarose Resin	HisSep Ni-NTA Agarose Resin 6FF	HisSep Ni-NTA 6FF Chromatography Column 5 mL / 1 mL	HisSep Ni-NTA MagBeads	Ni-TED Agarose Resin 6FF	Ni-TED 6FF Chromatography Column 5 mL
中文名称	His标签蛋白琼脂糖纯化树脂	His标签蛋白琼脂糖高速纯化树脂	His标签蛋白纯化预装柱 5 mL/1 mL	His标签蛋白纯化磁珠	His标签蛋白琼脂糖高速纯化树脂	His标签蛋白纯化预装柱 5 mL
基质	交联的6% 琼脂糖凝胶	高度交联的6%琼脂糖凝胶		磁性琼脂糖微球	高度交联的6%琼脂糖凝胶
耐压	0.1 MPa, 1 bar	0.3 MPa, 3 bar	0.3 MPa, 3 bar	N/A	0.3 MPa, 3 bar	0.3 MPa, 3 bar
纯化建议	基质的耐压一般，适合孵育法、重力柱小量纯化	基质的耐压性高，搭配蛋白纯化仪可以用于工业大规模蛋白的纯化		通过磁性分离快速便捷地进行蛋白纯化	基质的耐压性高，搭配蛋白纯化仪可以用于工业大规模蛋白的纯化
配体	Ni-NTA			Ni-NTA	Ni-TED
载量	＞40 mg 6×His-tagged protein/mL基质			> 40 mg 6×His-tagged protein/mL磁珠	>15 mg His-tagged protein（27.5 KD）/mL基质
耐受性	8 M urea、6 M 盐酸、0.5-1 mM DTT、1 mM EDTA等				24 h耐受10 mM EDTA、5 mM DTT、1 M NaOH、6 M 盐酸胍；2 h耐受500 mM咪唑，100 mM EDTA
应用	His标签蛋白纯化首选，载量高，耐受性一般，特别适用于原核表达纯化体系				载量稍低，耐受性超强，特别适用于真核表达纯化体系

附：HisSep Ni-NTA MagBeads（Cat#20561ES）产品特点

1、与传统预装柱和树脂相比，无需多次离心样本和控制上样流速，极大的缩短纯化时间。

2、一步纯化即可得到高达95％以上纯度的目标蛋白

3、目标蛋白产率高：产率可达到70～80％

4、可重复使用多达5次

5、可轻松调节目标蛋白浓度和体积

6、蛋白损失小，且不存在蛋白变性、沉淀的风险

附：His-Tag Protein purification Kit(Agarose Resin)（Cat#20751ES）

His-Tag Protein purification Kit(Agarose Resin) (His标签蛋白纯化试剂盒(琼脂糖树脂法)由HisSep Ni-NTA Agarose Resin（Cat#20502ES）、优化预制的缓冲液（平衡、洗杂、洗脱缓冲液）、5 mL重力层析空柱（Cat#20522ES）组成，用于纯化各种表达系统表达的可溶性His标签蛋白，为可溶性His标签蛋白的纯化带来了极大的便利。

产品性能

测试产品：

1、某知名品牌His纯化产品；

2、大量生产的FF高流速产品；

3、小样生产的FF高流速产品；

4、本次生产的普通级别的His树脂（20502ES）；

缓冲液：各个处理组均为1 mL树脂纯化200 mL菌液；洗杂使用25 mM的咪唑，洗脱液为250 mM的咪唑。

测试报告一：His纯化树脂结合效率测试，与市场知名品牌进行对比，Yeasen研发的20502ES HisSep Ni-NTA Agarose Resin （4号）具有良好的结合效率。如下图：

图2. His纯化树脂结合效率测试

测试报告二：以常利用的变性剂尿素为例，分别进行了不同产品在8M尿素下耐受性测试， 20502ESHisSep Ni-NTA Agarose Resin （4号）对尿素的耐受良好，与市场知名品牌无差异。如下图：

图3. His树脂对8M尿素耐受性测试

测试报告三：对于20502ES HisSep Ni-NTA Agarose Resin（4号）进行了批次检测稳定性测试，从结果看批次间差异基本控制在5%以内，以保证更好的稳定性。如下图：

图4. His纯化树脂的批次间比较

FAQ

常见问题	原因	优化建议
洗脱组分中无目的蛋白	蛋白可能是包涵体，没在上清中	可以通过电泳检测裂解液，分析上清中是否含有目的蛋白，包涵体蛋白需按照包涵体蛋白的纯化方式
	表达量太低	优化表达条件。
	目的蛋白结合比较弱，在洗杂步骤中已被洗下来	提高Wash Buffer的pH值，或者降低咪唑浓度
	目的蛋白结合过强，不容易洗脱下来	降低Elution Buffer的pH值，或者增加Elution Buffer中咪唑浓度。
	目的蛋白结合过强，不容易洗脱下来	使用10-100 mM EDTA剥离镍离子，同时得到目的蛋白
洗脱组分不纯（含多种蛋白）	洗杂操作不彻底	增加Wash Buffer体积
洗脱组分不纯（含多种蛋白）	样品中含有其他His标签蛋白	通过调节pH值或咪唑浓度来优化洗杂条件。再使用其他纯化手段（如去离子交换、疏水等）进一步纯化洗脱组分

产品信息

产品名称	货号	规格
HisSep Ni-NTA Agarose Resin His标签蛋白琼脂糖纯化树脂	20502ES10/50/60/80	10 mL /50 mL/100 mL/2x500 mL
HisSep Ni-NTA Agarose Resin 6FF His标签蛋白琼脂糖高速纯化树脂	20503ES10/50/60/80	10 mL /50 mL/100 mL/1000 mL
HisSep Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 5 mL His标签蛋白纯化预装柱, 5 mL	20504ES08/25	5 mL/5x5 mL
HisSep Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 1 mL His标签蛋白纯化预装柱, 1 mL	20505ES03/08	1 mL/5x1 mL
HisSep Ni-NTA MagBeads His标签蛋白纯化磁珠	20561ES03/08/25/60	1 mL /5 mL/25 mL/100 mL
Ni-TED Agarose Resin 6FF His标签蛋白琼脂糖高速纯化树脂	20497ES10/50/60/76	10 mL /50 mL/100 mL/500 mL
Ni-TED 6FF Chromatography Column, 5 mL His标签蛋白纯化预装柱5 mL	20498ES08/25	5 mL/5x5 mL
His-Tag Protein purification Kit(Agarose Resin) His标签蛋白纯化试剂盒(琼脂糖树脂法)	20751ES10	10 mL

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产品名称	货号	规格
Anti-His Affinity Gel Anti-His标签亲和纯化凝胶	20589ES03/08/25/60	1 mL /5 mL/25 mL/100 mL
Imidazole咪唑	20501ES60 /76	100 g/500 g

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来源： 翌圣生物

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