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应用案例MGISP-960在农作物重测序中的应用:大豆叶片的自动化文库构建流程

📂 NGS测序 类型 ID 5002
👁 340 次浏览 🗓 2026-10-09 源站内容 ID:2084489457574486016

基础变异检测、群体遗传学、叶片性状基因挖掘、分子育种等

1. 目的:建立适用于大豆叶片的全基因组重测序自动化建库流程

2. 平台:MGISP-960(华大智造)

3. 样本类型:大豆幼嫩或成熟叶片提取的DNA

4. 下游应用:基础变异检测、群体遗传学、叶片性状基因挖掘、分子育种等

5. 建库试剂盒:Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V4 货号:12972ES

6. 文库类型:Illumina

7. 自动化耗材和数量:96深孔板8个、PCR板6个、滤芯吸头7盒

8. 实验条件:

样本投入量

10 ng

25 ng

酶切片段化/末端修复/加A

程序

4℃-1 min;30 ℃(12-15 min);72 ℃-20 min;4℃ hold

接头连接

PE Adapter

2 μM,5 μL

连接程序

20℃ 15 min,4℃ hold

连接产物纯化/分选

0.6×磁珠(66 μL)纯化,104 μL洗脱,取100 μL分选,分选比例0.60×/0.15×;22 μL洗脱,取20 μL扩增。

PCR扩增

Index Primer

5 μL

循环数

11 cc

扩增后纯化

0.8×磁珠(40 μL)纯化,终文库32 μL洗脱,取30 μL上清

质控结果

文库产量

963 ng

1926 ng

文库峰图

来源与原文
来源: 翌圣生物
源站内容 ID:2084489457574486016
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