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应用案例MGISP-960在农作物重测序中的应用:大豆叶片的自动化文库构建流程
📂 NGS测序 类型 ID 5002
基础变异检测、群体遗传学、叶片性状基因挖掘、分子育种等
1. 目的:建立适用于大豆叶片的全基因组重测序自动化建库流程
2. 平台:MGISP-960(华大智造)
3. 样本类型:大豆幼嫩或成熟叶片提取的DNA
4. 下游应用:基础变异检测、群体遗传学、叶片性状基因挖掘、分子育种等
5. 建库试剂盒:Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V4 货号:12972ES
6. 文库类型:Illumina
7. 自动化耗材和数量:96深孔板8个、PCR板6个、滤芯吸头7盒
8. 实验条件:
样本投入量 | 10 ng | 25 ng |
酶切片段化/末端修复/加A | ||
程序 | 4℃-1 min;30 ℃(12-15 min);72 ℃-20 min;4℃ hold | |
接头连接 | ||
PE Adapter | 2 μM,5 μL | |
连接程序 | 20℃ 15 min,4℃ hold | |
连接产物纯化/分选 | 0.6×磁珠(66 μL)纯化,104 μL洗脱,取100 μL分选,分选比例0.60×/0.15×;22 μL洗脱,取20 μL扩增。 | |
PCR扩增 | ||
Index Primer | 5 μL | |
循环数 | 11 cc | |
扩增后纯化 | 0.8×磁珠(40 μL)纯化,终文库32 μL洗脱,取30 μL上清 | |
质控结果 | ||
文库产量 | 963 ng | 1926 ng |
文库峰图 |
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来源与原文
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图
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