应用案例基于MGISP-960自动化平台的葡萄叶DNA文库构建方法
葡萄叶片富含多酚、多糖等次生代谢物，常规手工DNA文库构建易出现核酸降解、杂质残留、文库质量不稳定等问题，难以满足大规模种质资源分子鉴定的需求。本研究依托自动化测序文库建库平台，针对葡萄叶片的样本特性优化全流程参数，通过平台精准的程序化移液与磁珠分选，完成片段化、接头连接、扩增等步骤，大幅减少人工操作带来的误差。经验证，该方法制备的DNA文库片段分布集中、得
葡萄叶片富含多酚、多糖等次生代谢物，常规手工DNA文库构建易出现核酸降解、杂质残留、文库质量不稳定等问题，难以满足大规模种质资源分子鉴定的需求。本研究依托自动化测序文库建库平台，针对葡萄叶片的样本特性优化全流程参数，通过平台精准的程序化移液与磁珠分选，完成片段化、接头连接、扩增等步骤，大幅减少人工操作带来的误差。经验证，该方法制备的DNA文库片段分布集中、得率稳定，可实现最大96份样本的同步批量处理，显著提升建库效率。本研究为葡萄种质资源遗传多样性分析、功能基因定位等后续组学研究，提供了高效可靠的文库制备支撑。
目的：
建立适用于葡萄叶的全基因组重测序自动化建库流程
平台：MGISP-960（华大智造）
样本类型：葡萄叶
下游应用：葡萄种质资源遗传多样性分析、功能基因定位、葡萄精准栽培与绿色生产、葡萄次生代谢与功能开发等
建库试剂盒：Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V4 一步法DNA酶切建库试剂盒V4
货号：12972ES
文库类型：华大
自动化简版流程
流程分类 | 流程（其他设置默认按12972说明书内容执行，说明书可依据货号在官网搜索下载） |
1 DNA片段化/末端修复/dA尾添加 | ① 加入样本，样本投入量：200ng （人工）； ② 进行片段化，片段程序选择30℃-15min。 |
2 接头连接 | 提前将接头从10uM稀释1.5倍（人工），加入片段化产物和连接试剂，进行连接程序孵育。 |
3 连接产物纯化和分选 | ① 对连接产物进行纯化，磁珠比例为0.8×； ② 对纯化产物进行片段分选，分选1磁珠比例：0.60×，分选2磁珠比例：0.15x。 |
4 文库扩增 | 将分选产物和扩增试剂混匀，进行扩增程序富余，扩增循环数选择6。 |
5 扩增产物纯化 | 对扩增产物进行纯化，磁珠比例为0.9×。 |
6 建库结束 | 建库结束，弹窗提醒人工取走文库。 |
案例结果展示（检测仪器：Qubit 4.0）
序号 | 物种 | 组织类型 | 文库浓度 （ng/μL） | 文库体积 (μL） | 总文库产量（ng) | 片段大小（bp）（抽检） |
1 | 葡萄 | 幼叶 | 54.25 | 28 | 1519 | 471 |
2 | 葡萄 | 幼叶 | 51.33 | 28 | 1437 | 473 |
3 | 葡萄 | 幼叶 | 60.69 | 28 | 1699 | 471 |
片段大小图（抽检，检测仪器：Qsep）
结论：文库浓度均在51-60ng/uL之间，片段大小在470bp左右，满足后续上机测序需求。
相关核心产品目录
应用 | 产品货号 | 产品名称 |
RNA建库 | Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V4 一步法DNA酶切建库试剂盒V4 | |
接头 | Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®, Set1（板式MGI平台接头，双端唯一短接头，Set1） | |
纯化磁珠 | Hieff NGS® DNA selection Beads (Superior Ampure XP alternative)DNA纯化分选磁珠 | |
自动化耗材 | 0.2 mL 96孔PCR板，白色，全裙边（NGS，伯乐款） | |
96孔深孔板，U底（1.3 mL) | ||
250 μL盒装滤芯透明无菌吸头 | ||
荧光定量QPCR压敏封板膜，内附刮板 | ||
文库浓度测定 | 1× dsDNA HS Assay Kit 即用型dsDNA qubit定量试剂 | |
Qubit专用检测管 | ||
核酸定量仪荧光计Qubit（单通道） | ||
文库条带大小检测 | GoldBand 100 bp plus DNA Ladder | |
YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) YeaRed 核酸染料（10,000× 水溶液） | ||
Agarose琼脂糖 | ||
1x TAE Buffer，TAE 缓冲液(粉末)，PH 8.0，1L |