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TechniquesStrep标签蛋白纯化攻略

📂 蛋白纯化 Type ID 5006

👁 11,554 views 🗓 2026-10-12 Source ID：736

Strep标签蛋白纯化攻略

Source: Yeasen Biotech ｜ Original: https://www.yeasen.com/solutiondetail/736 ↗

Strep标签发展史

生物素化蛋白

生物素化(Biotinylation) 是将生物素以共价键连接到分子（如氨基酸或蛋白质）上的过程。由于生物素很小，生物素化通常快速且具有特异性，不易干扰分子固有功能。

生物素与链霉亲和素(Streptavidin)具有极高的亲和力、快速性和高特异性，因此，生物素化被广泛应用于生物医学领域，生物素化蛋白作为一种分子工具广泛用于生物技术。

Strep-tag蛋白

Strep标签 (Trp-Arg-His-Pro-Gln-Phe-Gly-Gly)是能与链霉亲和素特异性结合的一种亲和标签。与生物素相比，Strep标签和链霉亲和素间的亲和力较低，因此可以使用生物素衍生物(Diaminobiotin)，进行在生理条件下的温和洗脱。但Strep标签仅能接在目标蛋白的C端，对于需将标签接在N端或是蛋白内部的实验，非常的不实用。

Strep-tagⅡ蛋白

经过进一步的优化后，得到了现在被广泛使用的Strep-tag Ⅱ (Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys)。链霉亲和素（Streptavidin）的突变体（二代）作为优化后的链霉亲和素，链霉亲和素（Streptavidin）的突变体（二代）:Strep-tag Ⅱ的亲和力较Streptavidin:Strep-tag Ⅱ提升了近100倍，这个改变使得洗脱时需改用脱硫生物素(Desthiobiotin) ，但过程一样温合。Strep-tag Ⅱ逐渐被广泛应用于纯化或检测蛋白质中，还甚至发展出细胞分离检测的方法。

链霉亲和素（Streptavidin）的突变体（三代）作为突变体（二代）的突变体，对Strep II标签的亲和力进一步提高，与生物素的亲和力大幅削弱。这个改变使其能够更牢固的结合 Strep II 融合蛋白，在融合蛋白表达丰度较低时，相对捕获量更高，载量和得率更高。在洗脱方面，可以使用生物素进行洗脱，比采用昂贵的脱硫生物素洗脱更经济，且使用后可采用 10~50 mM NaOH 进行再生。

Twin-Strep-tag蛋白

研究者们利用总结合力(Avidity)的原理，将两个Strep-tag Ⅱ以linker连接在一起，称作: Twin-Strep-tag Ⅱ。这一新标签的出现再度提升了目标蛋白与链霉亲和素（Streptavidin）的突变体（二代）、链霉亲和素（Streptavidin）的突变体（三代）的链接强度，改善了低浓度样本纯化效果，还能于捕捉蛋白复合体、检测蛋白间的相互作用。

产品简介

表1 .Streptavidin 、链霉亲和素（Streptavidin）的突变体（二代）、链霉亲和素（Streptavidin）的突变体（三代）Agarose Resin 对比

填料名称	Streptavidin Agarose Resin 6FF	Strep(Ⅱ)Sep Agarose Purification Resin 4FF	Strep(Ⅱ)Sep Plus Agarose Purification Resin 4FF
基质	高度交联的6%琼脂糖微球	高度交联的4%琼脂糖微球	高度交联的4%琼脂糖微球
粒径	45-165 μm
配体	Streptavidin	链霉亲和素（Streptavidin）的突变体（二代）	链霉亲和素（Streptavidin）的突变体（三代）
载量/mL基质	＞200 nmoL Biotin	3-5 mg Twin Strep-tag Ⅱ蛋白	8-10 mg Twin Strep-tag Ⅱ蛋白
产品应用	1、生物素或生物素化物质的纯化, 如固定生物素化抗体纯化抗原，或固定生物素化蛋白纯化抗体。 2、亚氨基生物素标签物质的纯化。	1、Strep-Tag Ⅱ标签蛋白纯化； 2、Twin Strep-Tag Ⅱ 标签蛋白纯化。	1、Strep-Tag Ⅱ标签蛋白纯化； 2、Twin Strep-Tag Ⅱ 标签蛋白纯化。
优点	1、链霉亲和素对生物素的结合能力与亲和素相当，但非特异性吸附远低于亲和素。 2、链霉亲和素对亚氨基生物素的亲和力相对较弱, 可以在非变性的条件下洗脱。	1、纯化过程温和、目的蛋白纯度高、特异性强、兼容多种表达系统，对于有挑战性蛋白的纯化十分有帮助。 2、使用脱硫生物素作为洗脱液，1 mM HABA或0.1MNaOH再生前后载量变化较小，可再生10次左右。	1、与生物素的亲和力大幅削弱，样品中低浓度(50 μmol/L)的D-生物素不会影响 Strep II 标签蛋白与Streptactin Plus的结合效果。 2、可以使用D-生物素进行洗脱，且使用后可采用10~50mM NaOH 进行再生，再生前后载量变化较小。
缺点	1、链酶亲和素与生物素结合非常牢固，只有将这些物质变性后才能从填料上洗脱下来。一般可不断开链霉亲和素和生物素的结合，0.1 M 甘氨酸（pH 3.0）断开抗原抗体结合。	1、使用D-生物素作为洗脱液，无法用HABA完全竞争取代，高浓度氢氧化钠（1 M）清洗后载量只能达到初始载量的50%左右，对填料损害较大	/

表2 翌圣Strep-Tag Ⅱ纯化产品选购指南

产品货号	20495ES	20494ES/20496ES	20795ES	20794ES/20796ES	20783ES
英文名称	Strep(Ⅱ)Sep Agarose Purification Resin 4FF	Strep(Ⅱ)Sep 4FF Chromatography Column, 1 mL / 5 mL	Strep(Ⅱ)Sep Plus Agarose Purification Resin 4FF	Strep(Ⅱ)Sep Plus 4FF Chromatography Column, 1 mL / 5 mL	Strep(Ⅱ)Sep Plus MagAgarose Beads
中文名称	Strep(Ⅱ)标签蛋白琼脂糖纯化树脂	Strep(Ⅱ)标签蛋白纯化预装柱，1 mL/5 mL	Strep(Ⅱ)标签蛋白琼脂糖纯化树脂（耐生物素版）	Strep(Ⅱ)标签蛋白纯化预装柱（耐生物素版），1 mL/5 mL	Strep(Ⅱ)标签蛋白纯化磁珠（耐生物素版）
基质	高度交联的4%琼脂糖微球		高度交联的4%琼脂糖微球		琼脂糖磁珠
配体	链霉亲和素（Streptavidin）的突变体（二代）		链霉亲和素（Streptavidin）的突变体（三代）		链霉亲和素（Streptavidin）的突变体（三代）
最大流速	300 cm/h	300 cm/h	300 cm/h	300 cm/h	N/A
载量	3-5 mg Twin Strep-tag Ⅱ蛋白/mL基质	3-5 mg Twin Strep-tag Ⅱ蛋白/mL基质	8-10mg Twin Strep-tag Ⅱ蛋白/mL基质	8-10mg Twin Strep-tag Ⅱ蛋白/mL基质	8-20 mg Strep-Tag II 蛋白/mL 磁珠
应用	适合孵育法、重力柱小量纯化，推荐实验室规模客户使用。也可搭配蛋白纯化仪用于工业大规模蛋白的纯化，更容易放大规模	预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA等，方便客户操作	适合孵育法、重力柱小量纯化，推荐实验室规模客户使用。也可搭配蛋白纯化仪用于工业大规模蛋白的纯化，更容易放大规模	预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA等，方便客户操作	通过磁性分离快速便捷地进行蛋白纯化，更容易实现高通量、自动化的蛋白纯化方法

附：Strep(Ⅱ)Sep Plus MagAgarose Beads （Cat#20783ES）产品特点

1、与传统琼脂糖填料的柱层析方法相比，使用磁珠不需要昂贵的层析和离心设备。

2、样品与磁珠的结合以及目的蛋白与磁珠的分离简单、快捷，而且更容易实现高通量、自动化的蛋白纯化方法。适合科研和工业客户高通量地进行Strep-Tag II或 Twin Strep-Tag II 标签蛋白的纯化。

产品测试

产品信息

产品定位	产品名称	产品编号	规格
链霉亲和素（Streptavidin）的突变体（二代）	Strep(Ⅱ)Sep Agarose Purification Resin 4FF Strep(Ⅱ)标签蛋白琼脂糖纯化树脂	20495ES08/25/60	5 mL/25 mL/ 100 mL
	Strep(Ⅱ)Sep 4FF Chromatography Column, 1 mL Strep(Ⅱ)标签蛋白纯化预装柱, 1 mL	20494ES03/08	1 mL/5×1 mL
	Strep(Ⅱ)Sep 4FF Chromatography Column, 5mL Strep(Ⅱ)标签蛋白纯化预装柱, 5mL	20496ES08/25	5 mL/5×5mL
	D-脱硫生物素	60164ES60/76	100 mg/500 mg
链霉亲和素（Streptavidin）的突变体（三代）	Strep(Ⅱ)Sep Plus Agarose Purification Resin 4FF Strep(Ⅱ)标签蛋白琼脂糖纯化树脂（耐生物素版）	20795ES03/08/25/60	1 mL/5 mL/ 25 mL/100 mL
	Strep(Ⅱ)Sep Plus 4FF Chromatography Column, 1 mL Strep(Ⅱ)标签蛋白纯化预装柱(耐生物素版), 1 mL	20794ES03/08	1 mL/5×1 mL
	Strep(Ⅱ)Sep Plus 4FF Chromatography Column, 5mL Strep(Ⅱ)标签蛋白纯化预装柱(耐生物素版), 5mL	20796ES08/25	5 mL/5×5mL
	Strep(Ⅱ)Sep Plus MagAgarose Beads Strep(Ⅱ)标签蛋白纯化磁珠（耐生物素版）	20783ES03/08/25/60	1 mL/5 mL/ 25 mL/100 mL
	D-Biotin D-生物素	60338ES03/10	1 g/10 g
链霉亲和素（Streptavidin）	Streptavidin Agarose Resin 6FF 链霉亲和素琼脂糖纯化树脂	20512ES08/25/60	5 mL/ 5×5 mL/ 100 mL
	BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 1mL 生物素分子纯化预装柱，1mL	20513ES03/08	1 mL/5×1 mL
	BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 5mL 生物素分子纯化预装柱，5mL	20514ES08/25	5 mL/5×5mL
	Streptavidin (SAV) MagBeads 链霉亲和素（SAV）免疫磁珠	47503ES03/08	1 mL/5×1 mL

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Original URL: https://www.yeasen.com/solutiondetail/736

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