前沿资讯T4 RNA连接酶2 |T4 RNA Ligase 2截短型，small RNA建库研究首选工具

在高通量测序技术日新月异的当下，small RNA（涵盖 miRNA、siRNA、piRNA 等）研究已然成为探索生命调控奥秘的关键领域。而基于T4 RNA连接酶的建库技术，作为small RNA研究的核心环节，却长期受两大技术难题困扰：

①连接效率欠佳：传统T4 RNA连接酶对短链RNA适配性不足，极易产生接头自连等副产物，致使文库出现严重偏好性；

②末端偏好性显著：普通酶易受RNA二级结构或末端修饰影响，从而导致数据偏差。

图1.传统T4 RNA连接酶在small RNA建库中的应用流程示意图^[1]

如今，T4 RNA连接酶2截短型（T4 RNA Ligase 2, truncated，T4 Rnl2tr）的问世，彻底改写了small RNA建库技术格局。该酶能够特异性催化5´端预腺苷化的DNA/RNA与RNA 3´-OH末端的连接反应。其独特之处在于无需ATP参与，不过必须搭配5´端预腺苷化接头使用。当它与T4 RNA ligase 1协同运作时，可实现打断RNA的直接接头连接，有效遏制接头串联和自连现象，大幅提升测序文库的构建质量。

图2.T4 Rnl2tr联合T4 RNA ligase 1在small RNA建库中的应用流程示意图^[2]

在此，我们向您推介翌圣生物全新研发的T4 RNA Ligase 2, Truncated KQ（Cat#14653）。这款酶作为T4 Rnl2tr的双点突变体（R55K, K227Q），在保持高效连接活性的同时，极大程度降低了RNA的非特异性连接问题，诸如 RNA 串联或自连成环等情况，堪称small RNA 3'端接头连接和cDNA文库构建的绝佳之选。

目前，翌圣生物已成功构建起完备的T4 RNA连接酶产品矩阵，满足您多样化的科研需求。其特点及应用见下表：

使用翌圣和来自进口Supplier A*的T4 RNA Ligase 2, Truncated KQ分别按照不同投入量加入体系中对31 nt的ssRNA底物（Substrate 1）和17 nt预腺苷化的ssRNA底物（Substrate 2）进行连接实验。结果表明，翌圣产品能高效连接 ssRNA 底物，连接效果与进口产品不相上下。

图3.T4 RNA Ligase 2, Truncated KQ连接效果验证

参考文献：

[1] Raabe C A , Thean-Hock T , Juergen B ,et al.Biases in small RNA deep sequencing data[J].Nucleic Acids Research, 2014(3):1414-1426.DOI:10.1093/nar/gkt1021.

[2] Sorefan K , Pais H , Hall A E ,et al.Reducing ligation bias of small RNAs in libraries for next generation sequencing[J].Silence, 2012, 3(1):4-4.DOI:10.1186/1758-907X-3-4.