News上新|T4核酸内切酶V：引领高效DNA损伤修复！

T4核酸内切酶V（T4 Endonuclease V），也被称为T4 PDG（嘧啶二聚体糖基酶），是一种具有双重活性的DNA 糖基化酶，结合了DNA N-糖基化酶和AP裂解酶活性。它可识别并结合因紫外线照射形成的cis-syn型环丁烷嘧啶二聚体，在嘧啶二聚体的5’端切割糖苷键，从而释放出二聚体并留下一个AP位点，随后AP裂解酶活性通过 β 消除切割 AP 位点，与 3'-α、β-不饱和醛和5'-磷酸末端形成1个核苷酸DNA间隙（图1）。

图1. T4 Endonuclease V反应原理示意图^[1]

T4 Endonuclease V可用于：

1、彗星实验（单细胞凝胶电泳）中增强对特定类型的DNA损伤，使损伤明显检测；

2、检测和定量DNA损伤（比如RADAR-seq技术 ^[2]，引入一段含有能被测序检测的甲基化碱基序列作为标记，以实现对损伤位点的检测、定位和定量）；

3、FFPE样本修复中识别并切割含有氧化损伤碱基的DNA链以启动DNA修复。

翌圣酶研发团队潜心研发，成功推出市售T4 Endonuclease V（Cat#14542ES）。翌圣T4 Endonuclease V来源于T4 噬菌体，蛋白纯度≥95%（SDS-PAGE法），不含非特异性DNA酶残留，大肠杆菌宿主gDNA残留＜0.05 copies/1U。

20 μL反应体系中，加入3个批次的3 U T4 Endonuclease V和 0.5 μg λDNA-HindⅢ digest，37℃孵育16 h，琼脂糖凝胶电泳DNA谱带不发生变化，表明翌圣Endonuclease IV不含非特异性DNase残留。

图2. 非特异性DNase残留检测

对3个批次的翌圣T4 Endonuclease V进行宿主(E.coli)基因组DNA残留检测，结果显示翌圣Endonuclease IV的宿主gDNA残留＜0.05 copies/1 U。

图3. 宿主gDNA残留

参考文献：

[1] Cafardi JA, Elmets CA. T4 endonuclease V: review and application to dermatology. Expert Opin Biol Ther. 2008 Jun;8(6):829-38. doi: 10.1517/14712598.8.6.829. PMID: 18476794.

[2] Selvam K, Sivapragasam S, Poon GMK, Wyrick JJ. Detecting recurrent passenger mutations in melanoma by targeted UV damage sequencing. Nat Commun. 2023 May 11;14(1):2702. doi: 10.1038/s41467-023-38265-3. PMID: 37169747; PMCID: PMC10175485.