GST标签蛋白纯化预装柱5ML GST蛋白纯化预装柱

Q：为什么洗脱组分中无目的蛋白？

A：可能是目的蛋白聚集产生沉淀，建议在细胞裂解前溶液中加入 DTT，终浓度为 1-10 mM。

Q：为什么柱子反压过高？

A：可能是填料被堵塞，建议清洗树脂。

Q：为什么电泳或 Western Blot 检测中发现多条带？

A：可能是Mr 70000 蛋白与目的蛋白一起纯化下来。Mr 70000 蛋白可能是大肠杆菌基因DnaK 的产物，建议可以在目的蛋白中加入 50 mM Tris-HCl，2 mM ATP，10 mM MgSO4，pH 7.4 在 37℃加热 10min 去除。

Q：为什么目的蛋白没有完全洗脱下来？

A：可能是非特异性疏水作用影响目的蛋白的溶解和洗脱，建议在洗脱液中加入非离子型洗涤剂，如 0.1%的 Triton X-100 或者 2%正辛基-β-D-吡喃葡糖苷 Tween-20。

Q：洗脱液怎么配？

A：按说明书用平衡缓冲液配制还原性谷胱甘肽（Cat#60342ES）即可，配完后需要检测PH是否跟平衡缓冲液一致，一般谷胱甘肽溶解后pH会偏酸，需重新调整到pH 7.4或pH 8.0（建议调整到pH 8.0，适当提高pH能提高洗脱效率）。