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Q:为什么柱子反压过高?
A:可能是样品中含高浓度的核酸,建议延长破碎时间直至粘度降低,或添加DNaseI(终浓度为 5 µg/mL),Mg2+(终浓度 1 mM),冰上孵育 10-15 min。
Q:为什么洗脱组分中无目的蛋白?
A:可能是表达量太低,建议优化表达条件,使用包涵体纯化缓冲体系。
Q:为什么上样过程中蛋白发生沉淀?
A:若蛋白发生聚集,建议在样品和所有缓冲液中添加稳定剂,如 0.1%Triton X-100 或 Tween-20。
Q:上样量一般是多少?
A: 具体上样量要根据填料的使用时间和载量, 该产品的载量为>40 mg 6 × His-tagged protein/mL基质。
Published citations
[1] Guo Z, Long L, Ding S. Characterization of a d-lyxose isomerase from Bacillus velezensis and its application for the production of d-mannose and l-ribose[J]. AMB Express, 2019, 9(1): 149. Ni–NTA agarose gel column and sodium dodecyl sulfate–polyacrylamide gel electrophoresis SDS-PAGE) IF:2.226
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