Plant Tissue PCR Kit (With Dye) 植物组织直接PCR试剂盒
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| 常见问题 | 可能原因 | 解决方法 |
| 阳性对照、待测样本均无条带。 | PCR反应体系或反应条件不合适。 | 使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。 |
| PCR试剂保存不当失去活性。 | 2×PCR Mix应保存于-25~-15℃，使用时避免反复冻融。若使用频繁，可在2-8℃短时间存放。 | |
| 引物设计问题。 | 尝试重新设计引物进行检查。 | |
| 阳性对照有目的条带，待测样本无条带或条带弱。 | 不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。 | 使用新鲜的试剂。 |
| 裂解液、中和液加入比例不当，裂解混合液影响PCR体系的pH值。 | 正常条件下，中和后的裂解混合液的pH应该在7-8左右（裂解产物和Buffer P2严格按照5:1的量进行中和）。 | |
| 样本裂解混合液保存不当或保存时间过久，DNA基因组已经降解。 | 裂解混合液可在2-8℃保存5天，尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。 | |
| 模板加入量不适合。 | 在反应体系＜5%范围内优化模板加入量。 | |
| PCR循环数不足。 | 适当增加PCR的循环数，推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂，一般PCR反应要比用纯化的DNA模板多5-10个循环为佳。 | |
| 非特异性扩增 | PCR退火温度太低，循环数、引物浓度或模板浓度太高。 | 提高PCR退火温度，降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。 |
| PCR引物错配。 | 重新设计PCR引物。 | |
| 配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。 | PCR反应体系的配制在低温下进行，配制完成后尽快进行PCR扩增反应。 | |
| 阴性对照出现目的条带 | 操作工具或试剂污染。 | 实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。 |
| 样本间交叉污染。 | 每个取样器只对一个样本使用；或取完一个样本后，将取样器刃口浸入2%的次氯酸钠溶液中，反复涮洗，然后用干净的纸巾擦干残液。 |
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