DMEM低糖养MSC需要额外补丙酮酸钠和谷氨酰胺吗？

补丙酮酸钠和谷氨酰胺一般不会因为“补多”直接损害原代细胞，前提是终浓度别超出文献范围太多，尤其不要用1%丙酮酸钠时误把100 mM母液加成10%。更值得担心的是母液保存时间：谷氨酰胺在4°C和37°C容易降解产生氨，会影响MSC。原代建系阶段，变量越少越好，所以能买预混的DMEM低糖就买预混，比手动补加更稳。若担心影响，可以设一组不补、一组补，做贴壁率和早期增殖对比。

500 mL开瓶后建议立即分装，但DMEM液体不建议反复冻存。常用做法是无菌操作分到50 mL离心管，留一小部分放37°C或取样做无菌检查，其余4°C避光保存，尽量4-6周内用完。如果非要-20°C冻存，恢复后可能出现磷酸盐沉淀，需在室温轻摇看是否复溶，且必须重新调整CO2平衡后测pH、观察颜色和澄清度。MSC建系阶段建议优先保证培养基新鲜，不要依赖冻存液。

建议直接买含GlutaMAX和丙酮酸钠的DMEM低糖成品。GlutaMAX比普通L-谷氨酰胺稳定，原代细胞培养不容易因为谷氨酰胺降解产生氨。补1%丙酮酸钠和2 mM谷氨酰胺是文献里常见终浓度，自己配容易因为母液反复冻融或过滤引入变量。成品省去称量、调pH、过滤，也减少污染风险。买前让代理提供COA，确认是否含酚红、NaHCO3和丙酮酸钠。预算不是特别紧的话，原代建系阶段尽量用成品，条件更一致。

如果已经买了普通低糖DMEM，需要补的话：100 mM丙酮酸钠母液按1:100加，终浓度1 mM；200 mM L-谷氨酰胺按1:100加，终浓度2 mM。谷氨酰胺母液一定分装-20°C，避免反复冻融和37°C长期放置。补完后在超净台混匀，最好0.22 µm过滤再分装。FBS本身含一些营养，但MSC原代对谷氨酰胺需求较高，建议不要省略。先小量试配并观察原代细胞贴壁，再用于整批建系。