固定破膜后还能用哪些流式抗体染胞内指标，求推荐兼容的荧光素？

PE信号下降有时不全是抗体问题，固定时间过长或破膜液太强也会损伤荧光素。建议固定常温20-30分钟或4度过夜后充分洗，不要超过说明书太久；胞内IL-17A染色放在破膜后，抗体稀释液用破膜buffer。如果PE实在不行，可以把IL-17A转APC，把其他表面标记放FITC/PE。多色方案里胞内指标尽量分配给APC/BV421这类稳定荧光，表面指标放PE会更亮。

固定破膜后PE信号下降，可能与固定剂、甲醇透化或克隆表位破坏有关，不是所有PE都会差。优先选对固定破膜耐受的小分子染料：APC、Alexa Fluor 647、eFluor 660、BV421。BV421亮度高，但需要仪器有紫激光；如果你机器没有紫激光就别买。APC在固定破膜后通常比PE稳定，且与破膜液兼容好，适合胞内IL-17A。染色时胞内抗体一般在破膜后加，孵育时间延长到30-45分钟，能改善信号。

IL-17A常用克隆号有eBio17B7、TC11-18H10.1、BL168，国内比较容易买到。eBio17B7的APC或Alexa Fluor 647版本在固定破膜后表现较稳，个人做Th17分群够用；BioLegend的BL168 APC也可以，亮度略弱但能分开。BV421版本最好先确认仪器有405 nm激光。不同试剂盒固定破膜强度不同，建议先用同一克隆的APC和PE做小量对比。国内现货3天要跟代理商确认批次，一线城市代理常备常见克隆。