siRNA转染HepG2细胞用什么转染试剂沉默效率高？

如果化学转染始终不行，可以考虑电转或慢病毒shRNA。HepG2用电转做siRNA效率可以，但细胞死亡率会升高，需要优化程序；慢病毒shRNA周期长但更稳。建议先花两周把化学转染条件摸完：细胞密度、siRNA量、试剂量、换液时间。另一个常被忽略的坑：siRNA冻干粉溶解后分装保存，避免反复冻融，否则降解后也会出现假阴性。

HepG2用Lipofectamine RNAiMAX这类比普通脂质体毒性低，但如果你要国内现货，可申请锐博、吉玛或诺唯赞的siRNA专用转染试剂，它们多针对肝细胞做过优化。操作上建议细胞密度50-60%时反向转染，用Opti-MEM稀释，siRNA和试剂孵育10-15分钟就够，不要过久。24孔板体系500 μL，转染后4-6 h换液。血清对这类试剂影响不大，但换液后细胞状态会更好。

mRNA敲低不是越早越好，有些基因半衰期长，48 h才明显。你测48 h下降不明显也可能是对照siRNA设计问题或者mRNA提取/反转录效率差异。建议加做72 h蛋白水平，并用至少两个管家基因归一。同时转染后若有部分细胞死亡，活细胞里的mRNA可能被死亡细胞稀释，所以建议同时看细胞融合度和活率。我们HepG2转染后活率低于80%时，会降低siRNA量或试剂体积重新摸。

国产厂家一般会提供0.1-0.25 mL试用装，你直接找销售或官网申请，说清楚做HepG2 siRNA，让技术支持给推荐用量。大包装通常按0.75 mL或1.5 mL分装，货期快的话3-5个工作日。价格比RNAiMAX明显低，单孔成本能降不少，但具体要询价，不要只看挂网价。申请时问是否赠送阳性对照siRNA和HepG2验证数据，这样能省一轮条件摸索。

先确认siRNA设计和阳性对照。HepG2转染效率中等，30 pmol/24孔对某些位点可能不够。建议用已知阳性siRNA（如GAPDH或PLK1）做浓度梯度：30、50、75、100 pmol，同时设转染试剂对照组和NC si。如果阳性对照mRNA下降明显，说明试剂和操作基本没问题，再换目标siRNA序列。我们实验室在24孔板HepG2常用50-75 pmol，转染后24-48 h测mRNA，48 h不明显也可能是基因半衰期长。