即用型 Western 一抗哪个品牌跑内参最稳？

选即用型内参抗体，我会优先看稀释比和效期，而不是单纯按销量排名。口碑比较稳的是Proteintech、CST、Abclonal，但CST多数不是即用型，需要自己稀释和分装，保存要求高。Proteintech和Abclonal的即用型一般含防腐剂，4°C放一年问题不大，开封后避免污染和反复回温。采购时让销售提供该批次的推荐稀释比和效期说明，最好有试用装或小规格。对HeLa/293T，20ug总蛋白量偏大，先降上样量并做梯度稀释。一周跑两次的实验室建议固定抗体批号、稀释液和曝光参数，减少批间波动。

HeLa和293T上样20ug跑内参，条带拖尾不一定是抗体本身，先建议把上样量降到10-15ug，并检查转膜液是否新鲜、封闭是否至少1小时、一抗孵育时间是否过长。即用型我近半年用Proteintech的beta-actin，1:5000稀释，4°C保存效期大约一年，条带较实。如果想直接换，先申请试用装，同一批样品跑一块膜与旧抗体并排比较。Abclonal也有小包装，稀释比可以做到1:10000，适合一周两次的通量。确认新抗体没有非特异条带后再批量采购。

近半年我主要对比了Proteintech、Abclonal和碧云天的即用型内参。Proteintech的β-actin 1:5000-1:10000，背景和拖尾比我之前用的分装货好一些；Abclonal的GAPDH条带较干净，小包装试用容易申请；碧云天价格友好，但稀释比略低，效期要注意4°C避免反复拿取。HeLa和293T上20ug总蛋白做内参偏高，容易过曝拖尾，降到10-15ug或把一抗稀释比再提高会更稳。建议两家都申请试用装，用同一批样品并排跑3次，选条带形态和批号稳定性更好的，不要只看单次结果。