CCK-8试剂盒做96孔板细胞增殖怎么设置对照和加样？

96孔板增殖实验建议最少设四类孔：空白孔（只加培养基和CCK-8，无细胞）、对照组（细胞加溶媒或培养基）、实验组（细胞加药物）、药物背景孔（培养基加药物和CCK-8，无细胞）。每组5复孔，边缘孔最好用PBS或无菌水封一圈，减少蒸发和边缘效应。加CCK-8前一般不需要换液，直接每100微升培养基加10微升CCK-8，加样时沿孔壁轻打，避免气泡，加完轻晃混匀。如果药物本身有颜色或还原性，药物背景孔必须做，否则OD会虚高或偏低。

试剂用量按你的设计算：比如60个实验孔加若干背景孔，每孔加10微升CCK-8，一次大约需要0.6-0.8毫升，1毫升装量基本只够一次多，5毫升装量可以多次用。单盒500-800元是否正常，要看装量和规格，这个价位在国产和进口常见规格里都有，但别只看单价，要算每孔成本以及是否配说明书、避光保存条件。CCK-8避免反复冻融，建议分装后-20℃避光保存，开封后尽快用完，避免反复升温影响稳定性。

血清和酚红在常规浓度下对450纳米读数影响通常不大，但如果你培养基颜色深或细胞代谢后明显变黄，最好在加CCK-8前换液或设置背景孔扣除。不同厂家显色时间差异确实存在，同一类细胞也可能不同，建议先做预试：加CCK-8后每0.5-1小时读一次，找OD值还在线性范围且空白不高、对照组OD在1.2-2.0之间的时间点，不要固定参照说明书某一个小时。读数前避免孔内有气泡，气泡会显著干扰OD。