应用方向抽提效率突破90%！升级版血浆游离DNA提取试剂盒，实力登场！

cfDNA（Circulating free DNA）简称循环游离DNA，是指循环血中游离于细胞外的部分降解了的机体内源性DNA。正常生理情况下，cfDNA主要来源于衰老凋亡细胞基因组DNA的降解，当机体发生疾病时，如恶性肿瘤、外伤、器官移植排异、组织器官衰竭和感染重大疾病等，异常坏死细胞会释放大量DNA进入血液循环。

图1.cfDNA的来源

游离核酸（cfDNA）是一类高度片段化的 DNA分子，片段分析则呈现 170bp 左右的一个主峰、340bp 左右的一个伴峰、510bp 左右的一个次伴峰以及其他伴峰。

图2.cfDNA的特点

目前已经在血浆、血清、尿液、前列腺液、支气管灌洗液、唾液、脑脊液、胃液、胆汁、淋巴液、腹腔液及类便中检测到了游离循环核酸。随着精准医疗时代技术的发展，越来越多的研究者和医生将基于cfDNA检测的”液态活检”技术应用于产前诊断，肿瘤的筛查，早期诊断，治疗监测和预后评估等多个方面。

为了克服cfDNA在血浆样本中微量、片段短的痛点和难点，翌圣全新推出MolPure® Magnetic Circulating Cell-Free DNA Kit（18382ES）,该产品适用于从0.3-4 mL的血浆、血清样本中的提取游离DNA。

采用cfDNA保存管采集健康人全血，通过离心分离血浆和去除细胞碎片等杂质。提取4个2mL健康人血浆样本，50 µl的洗脱体积，并采用Qubit定量，样本浓度（ng/ µL），结果显示，18382相对竞品A有更高的提取效率。

图3.18382对血浆cfDNA的提取能力

采用400 ng梯状条带 DNA Lader 分别添加入1 mL模拟血浆和1 mL TE buffer中，并以模拟血浆未加DNA Lader作为阴性对照，如图4所示，18382ES在不同模拟基质样本中，回收率均在90%以上。

图4.18382对不同片段长度DNA的提取能力

3个EDTA抗凝的健康人血浆样本采用18382ES和竞品A提取cfDNA,采用Hieff NGS^TM DNA Library Prep Kit（13577ES）对cfDNA进行建库，不同样本不同提取试剂的文库浓度和数据质量如图5所示，18382提取cfDNA在文库浓度、数据质量和插入片段与竞品A相当。

图5.18382提取cfDNA的文库构建数据质量

将5%突变频率Kars12D标准品梯度稀释为1 ng/uL，制备成模拟cfDNA 。取 10μL 并用 1 mL 血浆稀释成模拟样本，采用18382ES和竞品A提取模拟cfDNA，取2µL cfDNA进行qPCR定量检测(11211ES)，如图6所示，低至6 copies/mL的突变片段，18382ES提取之后未出现漏检的情况。

图6.18382提取含低频突变的模拟cfDNA样本，低频突变检出率分析