应用方向核酸助沉剂Carrier RNA助力低丰度SARS-CoV-2假病毒核酸检测
核酸助沉剂常见类型、作用原理及优缺点介绍
1. 核酸助沉剂概念及作用
荧光定量PCR是分子诊断主流技术,包括核酸提取和PCR扩增两个环节,两者共同决定了该检测方法的评测参数。以最直观最关键的检测灵敏度指标来看,只有实现了提取环节最优化和PCR扩增环节最优化的情况下,检测灵敏度的结果才更可信。检测灵敏度显示了检测试剂的检测下限,对于荧光定量PCR而言,即一定样本浓度下的病毒核酸检出率。
Carrier RNA,中文名载体RNA,又叫核酸助沉剂。在核酸提取环节,提取使用到的离心管壁多是聚丙烯的材料,管壁上有静电,会吸附核酸。在提取纯化过程中采用Carrier RNA 可帮助核酸去除静电效应,保证核酸能很好被吸附到纯化柱上,提高洗脱效率,从而达到尽可能多的回收样本中核酸!
2. 核酸助沉剂常见类型
作为核酸沉淀的辅助物质,核酸助沉剂有多种类型。
类型 | 代表物质 | 作用原理 |
多聚糖 | 糖原 | RNA在高盐、无水乙醇环境中溶解度很低,通过高速离心可发生沉淀。当RNA浓度很低时,微量RNA不足以形成沉淀。在上述环境条件下,糖原也不可溶并可与RNA共沉淀,形成可视化沉淀。 |
核酸混合物 | PolyA钾盐、大肠杆菌总RNA、酵母总RNA、tRNA等 | 减少吸附损失,降低核酸酶攻击待提取核酸的概率。 |
其他 | 线性化丙烯酰胺 | 减少吸附损失 |
3. 产品介绍——上海翌圣生物生产的核酸助沉剂
翌圣生物Carrier RNA是酵母来源的RNA,无DNase、RNase酶残留,蛋白和DNA残留含量极低。可用于病毒核酸提取、微量DNA提取等实验,提取的核酸可用于后续RT-PCR,RT-qPCR等实验。产品分为液体和冻干型粉末制剂,便于直接使用和长距离运输、保存。
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 保存条件 |
Carrier RNA, 6 μg/μL | 19701ES03 | 1 mL | -20℃保存,可保存2年 |
Carrier RNA Powder, 216 μg/tube | 19703ES01 | 1 tube | 室温保存,可保存1年 |
Carrier RNA Powder, 310 μg/tube | 19704ES01 | 1 tube | 室温保存,可保存1年 |
本品为核酸混合物,产品使用非常简单,在纯化核酸过程中通过添加微克量(μg)的Carrier RNA,即可实现提升低至皮克级别(pg)微量核酸的沉淀效率,达到提升试剂检测灵敏度的目的。
其作用原理主要是通过混入大量核酸(Carrier RNA),减少了目标核酸物质的管壁吸附损失,进而提高微量的核酸纯化柱上的结合和洗脱效率,同时降低了提取环境中的RNase降解微量RNA的概率。
4. 应用案例
Carrier RNA的加入有助于低丰度SARS-CoV-2假病毒核酸检测
使用磁珠法拭子样本病毒DNA/RNA提取试剂盒(产品货号:19387ES),提取不同浓度的SARS-CoV-2假病毒样本核酸,后续使用新 冠检测试剂盒进行检测N基因。结果显示,添加Carrier RNA后,具有更高的提取效率,使下游检测更灵敏。
Ct值 | 0copies/mL | 125copies/mL | 250copies/mL | 500copies/mL | 1000copies/mL | NTC |
不加carrier RNA | N/A;N/A;N/A | N/A;N/A;N/A | N/A;40.4;N/A | N/A;40.16;40.88 | 38.05; 38.02 | N/A;N/A;N/A |
加carrier RNA | N/A;N/A;N/A | N/A;40.54;N/A | 40.2; 40.29; 38.95 | 38.61;39.03;38.59 | 37.53;36.34 |

见图1-1
Carrier RNA放置于65℃不同时间(3d,6d,9d)后,与提取性能标准保存条件一致
将Carrier RNA粉末分别放置于65℃ 3d,6d,9d进行加速试验测试,测试方案为:使用磁珠法拭子样本病毒DNA/RNA提取试剂盒(产品货号:19387ES),提取不同浓度的SARS-CoV-2假病毒样本核酸,后续使用新 冠检测试剂盒进行检测orf1ab和N基因。结果显示,与标准保存条件(-20℃)相比,置于65℃保存9天的Carrier RNA,性能不发生变化。定量仪器:Biorad CFX96,核酸提取仪:上海儒克生物 Purifier 32 核酸纯化仪。
VIC:
Ct值 | 0copies/mL | 250copies/mL | 500copies/mL | 1000copies/mL | 2000copies/mL | NTC |
65℃ 3天 | 36.32;36.03;36.26 | 35.16;35.41;39.26 | 35.19;36.58;35.44 | 33.80;33.55 | ||
65℃ 6天 | 36.28; 35.61;35.42 | 36.40;35.21;35.23 | 35.29;34.37;34.09 | 33.91;33.21 | ||
65℃ 9天 | 36.40;35.53;37.41 | 36.24;36.07;36.63 | 34.34;34.21;34.25 | 33.97;33.54 | ||
-20℃保存 | N/A;39.47;39.86 | 36.40;36.41;38.01 | 35.55;35.48;36.01 | 33.14;34.51;34.50 | 33.92;33.00 | N/A; 40.15;39.39 |
FAM:
Ct值 | 0copies/mL | 250copies/mL | 500copies/mL | 1000copies/mL | 2000copies/mL | NTC |
65℃ 3天 | 36.88;37.07;36.34 | 35.21;35.62;40.02 | 35.32;36.61;35.49 | 34.13;33.86 | ||
65℃ 6天 | 35.98;35.68;35.32 | 37.34;35.56;35.39 | 35.69;34.53;34.14 | 34.35;33.47 | ||
65℃ 9天 | 36.29;36.20;37.63 | 36.60;35.86;36.31 | 34.83;34.41;34.61 | 34.00;33.58 | ||
-20℃保存 | N/A;N/A;N/A | 36.06;36.27;39.08 | 35.63;36.04;37.43 | 33.5;35.11;34.49 | 34.09;33.09 | N/A;N/A;N/A |


见图2-1、图2-2
翌圣Carrier RNA V.S. Q同类产品
使用磁珠法拭子样本病毒DNA/RNA提取试剂盒(产品货号:19387ES),提取不同浓度的SARS-CoV-2假病毒样本核酸,后续使用新 冠检测试剂盒进行检测N基因。结果显示,添加Carrier RNA后,具有更高的提取效率,使下游检测更灵敏。
VIC:
Ct值 | 0copies/mL | 125copies/mL | 250copies/mL | 500copies/mL | 1000copies/mL | NTC |
YEASEN | N/A;N/A;N/A | N/A;N/A;N/A | 38.76;38.47;39.53 | 38.83;37.60;37.82 | 37.91;37.17 | N/A;N/A;N/A |
Q品牌 | N/A;N/A;N/A | N/A;40.01;N/A | N/A;39.57;N/A | 37.42;39.06;38.85 | N/A; 36.04 |
FAM:
Ct值 | 0copies/mL | 125copies/mL | 250copies/mL | 500copies/mL | 1000copies/mL | NTC |
YEASEN | N/A;N/A;N/A | N/A;N/A;38.06 | 38.92;37.44;N/A | 35.71;38.51;36.36 | 35.31; 34.59 | N/A;N/A;N/A |
Q品牌 | N/A;N/A;N/A | N/A;38.85;N/A | 38.61; 36.75; 39.58 | 37.41;36.43;35.70 | 36.25;35.79 |


见图3-1、图3-2
5、相关产品
Carrier RNA提供成管冻干粉及液体类型,可直接用于各类应用场景。
产品名称 | 产品编号 | 规格 |
19701ES03 | 1 mL | |
19701ES08 | 5mL | |
19703ES01 | 1 tube | |
19703ES80 | 100 tube | |
19703ES92 | 1000 tube | |
19704ES01 | 1 tube | |
19704ES80 | 100 tube | |
19704ES92 | 1000 tube |
HB201223
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