ApplicationsCUT&Tag优于ChIP-Seq的关键竟是它？

CUT&Tag（Cleavage Under Targets and Tagmentation）是一种新的DNA-蛋白质互作研究方法，该技术涉及的核心酶原料是pG-Tn5或pA-Tn5(pA-Tn5 Transposase)。Protein A(pA)与pG的作用类似，特异性结合抗体，从而使得pA-Tn5具备更高的靶向性。Protein A 和 Protein G与不同种类和免疫原性的抗体的亲和力具有较大区别^[1]，因此pA和pG可以靶向结合不同抗体。

与传统的ChIP-Seq相比，CUT&Tag不需要使用甲醛交联以及免疫共沉淀，而是通过针对靶蛋白（如转录因子、染色质重塑蛋白）的抗体和Protein G/A的介导，使得与Protein G/A融合的Tn5酶在切割DNA片段的同时在序列两端加上测序接头，经PCR扩增后即可形成用于高通量测序的文库（图1）。CUT &Tag技术具有细胞投入量低、信噪比高、实验周期短（1天实现文库构建）、可重复性好等显著优势，可应用于蛋白质与DNA互作研究、检测组蛋白修饰在基因组上分布位点、鉴定转录因子在全基因组上的结合位点、超级增强子鉴定等。

图1. CUT &Tag技术原理图^[2]

由于CUT&Tag主要是针对极低细胞起始量进行实验，这就要求核心酶原料具有高切割活性、对微量DNA有高灵敏度和高亲和力以及超低污染性。翌圣ZymeEditor™酶改造平台将改造的具有超高活性的Tn5转座酶突变体与Protein G融合，从而获得能精准、高效切割目的蛋白附近DNA序列的pG-Tn5(Cat#14530ES)。翌圣pG-Tn5具有核酸酶残留低、片段化能力强（切割活性）、建库产量高等优势，可用于CUT&Tag实验。

参考文献

[1] Dancette OP, Taboureau JL, Tournier E, et al. Purification of immunoglobulins G by protein A/G affinity membrane chromatography. J Chromatogr B Biomed Sci Appl. 1999 Feb 19;723(1-2):61-8. doi: 10.1016/s0378-4347(98)00470-8.

[2] Kaya-Okur HS, Wu SJ, Codomo CA, et al. CUT&Tag for efficient epigenomic profiling of small samples and single cells. Nat Commun. 2019 Apr 29;10(1):1930. doi: 10.1038/s41467-019-09982-5.