荧光显微镜、共聚焦显微镜、荧光酶标仪、流式细胞仪等。
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40612原理是Mg2++HNB=蓝紫色,随着PCR增加,焦磷酸不断增多,焦磷酸与Mg2+结合,HNB游离,显示天蓝色。这个试剂里面有磷酸二氢钠,离子与Mg2+结合而立马产生化学反应导致的EDTA可以螯合钙镁离子,从而导致反应加速发生变色反应。
10的5次方copies/ul。
阳性对照是线性化的片段。
相比基础款GMyc-PCR支原体检测试剂盒,该升级款试剂盒的特异性更强、灵敏度更高、检测到的支原体种类更多。
分别是:Mycoplasma orale(口腔支原体)、Mycoplasma pneumoniae(肺炎支原体)、Mycoplasma hyorhinis(猪鼻支原体)、Mycoplasma salivarium(唾液支原体)、Mycoplasmopsis arginini(精氨酸支原体)、Myco…
40601是巢式PCR法,40612是LAMP法,40618是qPCR法。40612最快1个小时左右出结果,通过颜色变化判断支原体是否污染,覆盖药典要求的6种支原体(药典要求10种),可用于没有qPCR仪的客户使用。40601是通过巢式PCR后跑胶看条带大小判断支原体是否污染,覆盖药典要求的6种支原…
IC采用的是外源性内标,不是内参基因,主要用于监控提取和检测过程。他有两个用处,一是作为提取的一个内部质控,一个是作为pcr的内部质控,提取加入进去因为会损失一部分所以浓度需要高些,但是pcr的话浓度过高会竞争性的去目的核酸,ct值会变小,所以是需要稀释的。
可以不经过提取直接使用培养基来做,但是还是建议使用提取过程,因为有些样本里面抑制物会影响扩增结果。
支原体检测试剂盒是一个定性实验,不能检测出拷贝数。检测下限是最低定量限可做到0.5CFU/mL,对应Ct也小于40。
不仅广泛应用于哺乳动物细胞的研究,也可用于动物组织、植物细胞、细菌和酵母等细胞内的PH 水平检测。
不同PH 条件下,探针的荧光强度会变化。
如果是测定胞质内的钙离子建议选择 Fluo-3,AM、Fluo-4,AM,如果是测定细胞器——线粒体内较浓钙离子的实验建议采用 Rhod-2,AM。
如孵育完成后出现细胞脱落的情况,请优先考虑降低探针的工作浓度;其次可以更换为合适的稀释缓冲液,如使用无血清培养基。
根据后续检测确定是否需要消化后孵育探针,如果是流式细胞仪或荧光酶标仪检测,可以先收集细胞再孵育探针。如果显微镜观察,可以不用消化。
该探针检测的是细胞内总的钙离子水平,不具体区分细胞器。
Fluo-3 是最常用的可见光激发 Ca2+荧光探针、Fluo-4 是钙指示剂Fluo-3 的升级版本、Rhod-2 是另一种可见光激发的高亲和力Ca2+指示剂。
如果是测定胞质内的钙离子建议选择 Fluo-3、4,如果是测定细胞器内较浓钙离子的实验建议采用Rhod-2
Indo-1 是流式细胞术的首选染色剂,使用单一激光器进行激发(通常是氩离子激光器的 351-364 nm 谱线)并监测两种发射,Indo-1 的发射最大值从无 Ca2 +培养基中475nm 转变为当染料被 Ca2+结合饱和时的400nm。另外Fluo-4及Rhod-2等都可以使用流式细胞仪进行检…
工作液用最好是使用无血清培养基、HBSS 或是 PBS 等缓冲液进行稀释,稀释后的探针工作液即可直接加入细胞进行检测。