可能是抗体被降解;建议适当的提高洗脱pH。
室温保存即可。直接用水冲洗就行或者用超声清洗仪清洗。
严禁冷冻该产品。应置于 4°保存。
磁珠的规格指的是包含保护液的总体积。
建议冻干粉保存,溶液现配现用。
有影响,如果储存液中无甘油,建议4度储存,如果有甘油,建议-20度储存,需要避免填料结冰。
不能直接连接蠕动泵使用;可以直接连接蛋白纯化仪使用,如AKTA.
重力空柱一般装填填料体积为空柱体积的1/10-1/2.
可以先跑胶鉴定下样品、流穿和洗脱;判断是样品本身表达的问题,还是未结合或未洗脱下来。
填料规格指的是填料的体积,不包含保护液的体积
磁珠上的配体跑还原电泳分子量在15kd。
这个一般不洗脱,是用于后续实验的。
可以尝试80℃加热2-5min进行洗脱。
会影响,不能冷冻。
可以封闭;为了避免额外的蛋白引入,我们一般是用1M乙醇胺或者1M Tris进行封闭。
缓冲液成分是:10mM Tris-Cl (pH 7.5), 1mM EDTA (pH 7.5), 0.1% (m/V) SDS。
结合生物素的载量约为700pmol/mg。
可以在洗杂缓冲液中加0.5%的Tween-20 ,并补加氯化钠0.15-0.2M,清洗磁珠过程可以加入buffer 悬浮混合2-3min,洗杂过程有更换EP管。
变性洗脱得到的是抗体-抗体复合物;蛋白是直接偶联到磁珠上,变性洗脱条件不会把A/G洗下来。
如果已经构建好非E.coli体系的质粒,需做密码子优化即可。