mRNA和lncRNA可以的,但是miRNA可能有损失,建议用专门的miRNA提取试剂盒(19331ES/19332ES)。
细胞数量控制在10^6~10^7范围内均可。若细胞数量低于5×10^6,起始细胞量不足,会降低核酸提取效率;若细胞数量偏高,则需相应增加裂解液用量。裂解液不足会造成内源 RNA 酶裂解不充分、抑制效果不佳,进而引发 RNA 降解。同时受吸附柱负载上限限制,不可过度增加样本投入量,否则易造成杂质去除不…
可以,货号为83666ES,包含柱子和收集管。
(1)可能是实验材料质量或样本量不足。(2)破壁或裂解不充分。植物要充分匀浆研磨充分,试剂盒中的破壁酶避免保存不当,洗脱液预热或多次过柱。
(1)可能是实验材料不新鲜或反复冻融。(2)提取过程中操作过于剧烈,DNA 被机械打断。解决方案:尽量使用新鲜材料,低温保存材料避免反复冻融;液氮研磨或者组织匀浆后,后续操作尽量轻柔,DNA 洗脱液避免反复冻融。
(1)杂蛋白、RNA 污染。(2)乙醇残留。Wash buffer 中需添加无水乙醇或避免乙醇挥发; 空管离心,保证乙醇挥发彻底。
可能是提取产量低、DNA 出现降解或纯度低。DNA 提取实验包括样本预处理及DNA 提取两个环节,涉及到提取材料的新鲜程度、样本裂解-核酸的释放方式、柱结合能力等多个关键点。下面将可能的原因及解决方案总结如下:
可以的,-20℃保存建议不超过1周。
起始菌液量 2-6 mL,提取产量 5-35 μg。
不建议省略去蛋白液,会影响提取的纯度;洗脱可以用无酶水替代。
可能存在以下原因:(1)拷贝数低或者大于10kb的质粒应加大菌体使用量,并按比例增加后续buffer的用量;(2)细菌可能没有充分裂解。
裂解液中含有NaOH,低温状态下可能存在盐离子析出,可 37℃温浴复溶至溶液澄清再使用。
可能RNA未去除干净(样本太多或者添加了RNase的缓冲液 RS酶活下降)或者裂解时间太长导致质粒受到破坏。
可能是本身内毒素低,也可能是加入 ER 溶液后,因为体系的 PH 差异、抑制物等,使得内毒素的凝集状态反应不一样。
可能原因如下:(1)拷贝数低或者大于10kb的质粒应加大菌体使用量,并按比例增加后续buffer的用量(2)细菌可能没有充分裂解
裂解液中含有NaOH,低温状态下可能存在盐离子析出,可 37℃温浴复溶至溶液澄清再使用。
可能RNA未去除干净(样本太多或者添加了RNase的缓冲液 RS酶活下降)或者裂解时间太长导致质粒受到破坏。
提升离心温度;加大离心转速;增加离心时间。
可能原因如下:中低拷贝质粒:长片段、表达型载体常以低拷贝为主,建议加大菌体使用量,菌液过夜培养菌种问题:菌种保存中质粒丢失,养菌前先划线活化,稳定产量菌体未充分裂解:在buffer种充分重悬,避免成团试剂准备有误:有沉淀析出的溶液需要加热;加入的乙醇体积不准洗脱不充分:洗脱液预热,二次洗脱
可能原因如下:培养时间太长:培养时间建议控制在12-16h;裂解不充分:确保裂解后菌液应清亮粘稠。