就我们的其他客户返样，我们用Qsep100测的CE结果来看，比较理想的状况CE完整度能到88~92％；当然做到这个水平通常也需要经过一系列的优化；一般产量是在120-220ug/ul（产量与序列设计有很大关系），共转录方式，mRNA产量有8g/L，做工艺优化产量会提升，目前市面上的工艺质量参数，有的…
RNA电泳我们也会做，主要是简要的看一下产物纯度，是否有明显的聚体这些；如果是看RNA大小，电泳的时候一般会点一个明确大小的RNA样，作为参考。
对模板的检测目前能找到的主要是序列完整性还有内毒素、宿主核酸残留这些检项，RNase还没有明确找到对应的检测建议方法；或者也可以参考我们酶产品中RNase残留的检测方法，相对还是比较简单可靠的。
IVT过程中的ds生成有多种可能的原因，主要有：①T7 pol会以产物RNA作为模板，在其3'末端继续延伸RNA，延长序列与原RNA分子3'末端序列互补配对，形成发卡结构；②T7 pol可以把RNA当作模板来复制RNA分子，合成与其互补的另外一条链；（除去dsRNA目前是没有很好的方式，有专利报导用…
关于优化IVT体系与反应条件抑制dsRNA的建议主要还是以下几点：①降低镁离子浓度；但降低镁离子浓度也会导致RNA合成产量的降低，需要去一个平衡点；②提高IVT反应温度，50-56℃的反应温度能有效降低产物中dsRNA的含量；但是高温反应对工艺放大设备的要求会不一样，也可能提高成本；③IVT反应体系…
内部有研究过这个沉淀，是镁离子、RNA、钠离子和焦磷酸镁的聚合物，且有个凝聚作用，聚团会不断变大（类似的胶状、絮状、颗粒沉淀都是类似原理）， 加水和加EDTA的效果类似也佐证了这个说法。原因：1.Mg离子浓度过高会和焦磷酸聚集形成焦磷酸镁沉淀，但是具有聚合作用，不断地包裹核酸形成胶状物导致产量下降。…
可以考虑WAVE、海道夫反应釜、赛多利斯，主要还是需要找到和现有IVT体系适配的袋子；对于搅拌罐体，螺旋桨的转速也需要根据实际情况优化，跟桨叶类型和大小有关系，建议可以向设备生产厂家咨询。
工业上酶法加帽最常使用的是牛痘病毒加帽酶处理IVT产物可以将其修饰成Cap 0 mRNA，Cap 0结构可以在二氧甲基转移酶（2'O-methyltransferase）的作用下进一步修饰成Cap 1（m7GpppmN）。利用酶法加帽，加帽效率可以达到95%以上。共转录加帽法操作简便，但由于GTP会…
建议整个反应时间在2-3小时之间，我司验证最长3h反应，合作客户有验证4h 反应结果正常。
该产品属于GMP级别产品，涵盖了无菌的要求，是无菌的产品
先升温是为了把RNA二级结构打开，让RNA处于单链状态。如果不进行这步操作的话，会影响加帽的效率。这部分目前的确是工艺生产上的难点。现在有的公司直接在模板序列确定时会对RNA的二级结构作预测，加帽酶只识别mRNA前几个核苷酸，如果确定这部分结构不会产生RNA的二级结构的话，可以不进行加热。
工业上酶法加帽最常使用的是牛痘病毒加帽酶处理IVT产物可以将其修饰成Cap 0 mRNA，Cap 0结构可以在二氧甲基转移酶（2'O-methyltransferase）的作用下进一步修饰成Cap 1（m7GpppmN）。利用酶法加帽，加帽效率可以达到95%以上。共转录加帽法操作简便，但由于GTP会…
通过增加VCE的量例如100ul体系加入10ul即100U的酶活，主要是增强VCE的甲基转移酶活性，也可以通过增加SAM（0.5mmol）增强鸟苷转移活性，增加加帽率。例如我们的新款单链加帽酶，它的加帽率显著提升，就是鸟苷转移活性比传统的更好，对于传统VCE，小亚基D12容易沉淀形成聚合物，纯化时容…
目前行业对这一块的没有做针对性的去除，行业里面主要是看加帽效率的多少，目前做的比较好的加帽率在80%以上，当然肯定是越高越好了。这个还没有一个绝对的标准。对于合成之后的mRNA，可以用纯化的方式处理，比如康*的一步膜包，极大的减少了纯化工艺，传统用Oligo d（T）的柱子做纯化，效果好可以回收率7…
-80ºC 保存没有测试过，建议用-20ºC 保存。
用无菌水稀释即可，稀释后能保存多久暂未有明确验证数据，建议现稀释现用。