我们的T7酶测试了相对保真度，与Thermo的保真度差不多，大概万分之四的突变率。目前野生型的T7保真度都差不多，基本能满足客户的需求。现项目中没有更高保真度T7的开发计划。
是通过LiCl纯化后进行测定的，我们有记录过相关数据A260/280大概比值再在2.0-2.1之间；使用我们的羧基磁珠纯化也基本在这个范围以内。具体数据可以整理之后再分享。
这一情况是T7反应体系的自身特性，无法完全避免。根据相关的文献，控制mRNA自延长的思路主要还是两方面：①对模板3'末端上游序列进行优化；②控制IVT产量，高产量下自我延伸的几率会更高
目前没有了解过是否影响计算，NanoDrop 的检测方法比较粗略，如果想要更精确的检测，可以使用Qubit检测RNA的浓度，这两种方法也是市面上比较常见的两种检测方法。
一般采用完全替代的方式，假尿苷或者 N1-甲基假尿苷的使用量与原体系尿苷的使用量一致。
mRNA体外转录模板制备方面，限制性内切酶的选择主要基于以下因素：①切口处应该是5´ 突出末端或者平末端。3´ 突出末端的存在会增加从模板体外转录（IVT）产生的假副产物；②酶切位点识别序列尽可能长；识别序列越长，该序列出现在基因片段中的可能性就越小；③IIS 型内切酶是用于疫苗开发中质粒线性化的首…
我们转录Buffer是10X的浓度，在IVT体系的终浓度是46mM，是会高于一些其他品牌。我们有做过Mg2+单因素研究的一些数据（具体不太方便公开），确定了该使用浓度。我们另外提供不含Mg2+的buffer（10669ES），方便客户自行调配Mg2+在转录体系中的终浓度，从而调节IVT产量和副产物之…
配方不同，10670ES是升级版本，我们优先推荐使用10670ES,应用场景更广，性能更好一些。
共转录要求对于模板的起始位点要求必须是 AGG* 开头两步法对于位点无要求，但我司目前产品对于AGGG起始位点的产量最高，主要是T7酶的偏好性导致。
可以在插入位点下游选择限制酶切割，切割产生平末端或 5-突出端最好。
37℃和 42℃转录能力无差别，但是不耐 50℃。
模板线性化不完全，导致转录停不下来，所以转录条带会偏大，出现杂带。
我们的T7酶测试了相对保真度，与Thermo的保真度差不多，大概万分之四的突变率。目前野生型的T7保真度都差不多，基本能满足客户的需求。现项目中没有更高保真度T7的开发计划。
是通过LiCl纯化后进行测定的，我们有记录过相关数据A260/280大概比值再在2.0-2.1之间；使用我们的羧基磁珠纯化也基本在这个范围以内。具体数据可以整理之后再分享。
这一情况是T7反应体系的自身特性，无法完全避免。根据相关的文献，控制mRNA自延长的思路主要还是两方面：①对模板3'末端上游序列进行优化；②控制IVT产量，高产量下自我延伸的几率会更高。
无核酸外切酶、切口酶、Rnase 残留残留。
体外转录后长度：1142bp；质粒模板本身长度~3700bp。
polyA 尾是设计模板时引入，加帽是单独加。
①提高NTP，帽类似物的投入量比例；②添加剂的合理应用；③反应温度可以用到40度。IVT体系优化可以从模板，T7酶的使用量，如果是共转录加帽可以考虑帽子与NTP之间的比例；酶法加帽的话，在加帽酶，2-O-甲基转移酶以及SAM的用量配比上进行条件优化。关于模板除了线性化要完全这一块，还有一点就是序列设…
20uL体系等比放大到10mL应该得率差不多的，我们一般从20uL直接放大到50mL，得率基本也在100ug/20uL的水平；我们50mL也会用离心管和金属浴的方式来测，10mL正常来说应该放大效果更好；这种情况下，一般建议酶和NTP的终浓度微调一下再试试。