有 A 尾的 lncRNA 用预混液和 KIT ( 11123/11141/11121/11139) 都可以, circRNA、miRNA 和无 A 尾的 lncRNA 用 KIT(11121/11139)。microRNA可用这款试剂盒, 需要自备相应的茎环引物。
a)目的不同:克隆逆转后的 cDNA 后续用于基因克隆,后续实验以普通 PCR 为主; 定量逆转后的 cDNA 后续用于基因定量,后续实验以qPCR 为主。逆转录过程不同:克隆逆转使用 Oligo dT,保证合成的长度。随机引物使用较少; 定量逆转使用 Oligo dT 或随机引物,或两者混合使用。…
RNA 的物种与逆转录没有很大关系,RNA 质量与逆转录有关。所以,得到 RNA 后, 逆转录试剂盒都可以用,没有特别针对的。
原因:若去除试剂中残留 RNase,会使 RNA 发生降解,减少了 RNA 模板量,导致效果差。检测方法:RNA 去除试剂前后分别进行电泳检测,检测RNA 完整性。优化方法:选用无RNase 级别的 gDNA 去除试剂。
可以的,设计特异性引物替代试剂盒中的引物加入到程序中。参考程序如下:茎环引物(10uM) :1ul上一步的反应液:15ul10×super buffer:2ulRT enzyme mix: 1ulddH2O: 1ul
25°C 5 min 是引物退火步骤,核心作用是让 Random Primers N6 与 RNA 模板充分结合。
推荐用于qPCR 实验,常规长度基因克隆实验也可以用。
Hifair® Ⅲ SuperMix 只有 3 个组分,且每个组分的添加体积均超过 1μL,因此移液误差更小,重复性更好。
常规模板 55℃即可,如果是具有复杂二级结构的模板或高 GC 含量的模板,可将温度适当提高至 65℃,有利于提高逆转录效率。
可以根据需求选作gDNA去除。
根据实验目的不同,可按下列建议选择(选择指南可见下表):对于全长第一链 cDNA 合成,且模板为真核生物来源,推荐选择Oligo (dT)引物。b)当目标区域具有复杂二级结构或模板为原核生物来源,推荐选择 Random Primers 引物。c)基因特异性引物(GSP)是与模板序列互补的引物,适用于…