逆转录系列FAQ

有 A 尾的 lncRNA 用预混液和 KIT （ 11123/11141/11121/11139） 都可以， circRNA、miRNA 和无 A 尾的 lncRNA 用 KIT（11121/11139）。microRNA可用这款试剂盒， 需要自备相应的茎环引物。

a）目的不同：克隆逆转后的 cDNA 后续用于基因克隆，后续实验以普通 PCR 为主； 定量逆转后的 cDNA 后续用于基因定量，后续实验以qPCR 为主。逆转录过程不同：克隆逆转使用 Oligo dT，保证合成的长度。随机引物使用较少； 定量逆转使用 Oligo dT 或随机引物，或两者混合使用。…

RNA 的物种与逆转录没有很大关系，RNA 质量与逆转录有关。所以，得到 RNA 后， 逆转录试剂盒都可以用，没有特别针对的。

原因：若去除试剂中残留 RNase，会使 RNA 发生降解，减少了 RNA 模板量，导致效果差。检测方法：RNA 去除试剂前后分别进行电泳检测，检测RNA 完整性。优化方法：选用无RNase 级别的 gDNA 去除试剂。

可以的，设计特异性引物替代试剂盒中的引物加入到程序中。参考程序如下：茎环引物（10uM) :1ul上一步的反应液：15ul10×super buffer：2ulRT enzyme mix: 1ulddH2O: 1ul

25°C 5 min 是引物退火步骤，核心作用是让 Random Primers N6 与 RNA 模板充分结合。

推荐用于qPCR 实验，常规长度基因克隆实验也可以用。

Hifair® Ⅲ SuperMix 只有 3 个组分，且每个组分的添加体积均超过 1μL，因此移液误差更小，重复性更好。

常规模板 55℃即可，如果是具有复杂二级结构的模板或高 GC 含量的模板，可将温度适当提高至 65℃，有利于提高逆转录效率。

可以根据需求选作gDNA去除。

根据实验目的不同，可按下列建议选择（选择指南可见下表）：对于全长第一链 cDNA 合成，且模板为真核生物来源，推荐选择Oligo (dT)引物。b）当目标区域具有复杂二级结构或模板为原核生物来源，推荐选择 Random Primers 引物。c）基因特异性引物（GSP）是与模板序列互补的引物，适用于…