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细胞产品技术咨询FAQ

Q:40276ES观测到较高的本底干扰,这是什么原因所致?如何减少本底干扰?

叠氮化物和炔烃类间 Click 反应非常有选择性,生物体内几乎不可能有副反应发生,所以本底较高一般是由洗涤不充分造成的。减少本底干扰的最佳方法是增加BSA 洗涤的次数。同时, 也可在同样的检测条件下设置一组同等处理的无染料或无Click 反应对照,以排除自发荧光干扰。此外,还可在无 EdU 体系中进…

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Q:40276ES为什么标记样品无信号或特异性信号非常低?如何提高信号?

请保证试剂使用时为无色的状态,不要使用已经变黄的添加剂或缓冲液;为确保 Click 反应试剂能够到达核内,细胞需要充分地固定和通透;由于铜离子能结合到部分试剂上,这会导致催化 Click 反应的有效浓度降低。所以在 Click 反应前,不要在任何缓冲液或试剂中引入金属螯合剂(例如 EDTA、EGTA…

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Q:40284ES为什么不能检测血管呢?

EdU检测原理是将胸腺嘧啶类似物掺入S期新合成的DNA中,因此标记的是正在增殖的细胞。血管内皮细胞在正常静息组织中增殖率很低,所以说血管样本相对不易检测到EdU阳性。但在血管新生时会活跃增殖,此时可以有效检测增殖中的血管内皮细胞。

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Q:40301ES这款试剂盒是不是凋亡和周期均可以检测?

这款试剂盒是检测细胞周期的,细胞周期检测中细胞内的DNA被PI染色后,可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定,根据DNA含量的分布情况,进行细胞周期的分析。而对于凋亡的检测由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化导致部分基因组DNA片断在染色过程中丢失,因此凋亡细胞PI染色后呈现明显的弱染,在流式检…

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Q:40301ES做流式周期的时候,只出现单峰是什么原因?是不是PI染色试剂有问题?

试剂是没有问题的,出现单峰说明试剂是可以和核酸结合的,只出现单峰可能原因有以下几点:1.细胞状态的影响,建议调整细胞状态之后进行实验。2.细胞密度过密,如果细胞接种的时候过密会导致细胞接触抑制。3.原代细胞增殖率低。4.结果分析的原因。

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Q:40301ES流式分析细胞周期,收集了10的6次方细胞,但细胞在乙醇固定之后,还可以看到细胞沉淀的,但PBS洗涤两次之后,就基本没什么细胞沉淀了,上机发现看不到细胞了。怎么解决这个问题?

1. 先用冷PBS悬浮细胞,充分悬浮,使细胞充分分散成单细胞。之后缓慢加入预冷的无水乙醇,终浓度为70-75%乙醇。不直接加75%乙醇的原因是:直接加入乙醇会导致细胞团聚的现象,很难重悬成单细胞。乙醇固定之后没有细胞沉淀。2.很可能是洗细胞的过程中丢失了,解决办法有:采用尖底的离心管和水平离心机。离…

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