固定后会破坏溶酶体的酸性环境从而会造成荧光减弱甚至消失的情况,染色前后均不建议固定。
细胞分析FAQ
不可以,孵育二抗必须要透化处理,而透化会破坏溶酶体的酸性环境,影响染色效果。
自噬溶酶体和正常的溶酶体在形态结构上有较大差异,该探针主要是针对常规的溶酶体染色,对于自噬溶酶体的染色效果不是很确定。可以参考一些使用过该产品发表的文献资料确定可以染色其他酸性细胞器。
不可以。建议染色完立即检测荧光,荧光信号会随时间而逐渐减弱。
该探针适用的pH检测范围是4.5-6.0,pKa为5.2。
工作液是需要现配现用的,不建议保存。
荧光显微镜、共聚焦显微镜、酶标仪、流式细胞仪。
建议用 Hoechst 33258/ Hoechst 33342 染色细胞核,这个染料可以直接染活细胞不需要固定操作。
大致有 3 个因: 1.溶酶体探针浓度过低,建议适当增大浓度; 2.染色时间过短,建议延长染色时间; 3.染色完之后,放置过长时间才检测信号;建议染色完立刻检测。
大致有 3 个原因: 1.先用多聚甲醛、乙醛等固定细胞,破坏了溶酶体的酸性环境。 2.染色完后,又用多聚甲醛固定细胞,或者透化细胞,破坏了溶酶体的酸性环境;染色前后均不建议固定细胞; 3.染色完到上机检测这一段时间过长,并且没有避光处理。建议避光染色,染色完立即检测荧光信号。
有荧光信号,这主要是什么原因导致? 1.溶酶体探针浓度过大,建议适当降低浓度; 2.溶酶体探针染色时间过长,建议适当缩短时间。
LysoSensor™ Yellow/Blue DND-160 (PDMPO)是一种pH 依赖型显示双激发和双发射波长的荧光探针:
该产品是非无菌的。
该探针适用的pH检测范围是3.5-6.0,pKa为4.2。
该探针为无色溶液。
DMSO稀释为储存液,PBS稀释为工作液。
该产品浓度为1 mM,体积为200 μl。
由蓝色变为紫色
可以激发,转染质粒 EGFP,EYFP 对检测没有影响
不需要固定